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研究背景及目的子宫内膜异位症(Endometriosis,简称:内异症,EM)是生育年龄妇女最常见的疾病之一,一直以来内异症都是造成不孕的主要原因之一,其引起的痛经、下腹痛、性交痛等症状严重影响妇女的身心健康。子宫内膜异位症的发病机制尚不明确,一直以来Sampson提出的种植学说被广为接受。但经血逆流是经期女性的常见生理现象,发生率约80%～90%,其中内异症患者仅占10%～20%,对此现象郎景和教授及其研究团队对种植学说进行了解释补充,提出"在位内膜决定论":在内异症中经血逆流只是诱因,致病的关键系子宫在位内膜本身,而在位内膜干/祖细胞或其微环境的改变可能是根本原因。大量研究表明子宫内膜细胞是在免疫缺陷的基础上成功在其他部位种植生长的,且与细胞免疫密切相关。子宫内膜异位症患者常伴有局部及全身的免疫功能异常,PD-1/PD-L1信号通路作为T细胞免疫反应的协同刺激通路,在机体的免疫过程中发挥着重要作用。PD-1(Programmed death-1,程序性死亡因子1)是一种免疫共抑制分子,其配体有PD-L1(B7-H1)和PD-L2(B7-DC)。PD-L1广泛表达,既可以表达于免疫细胞,也可在多种非免疫细胞中表达。在健康的机体中,PD-1/PD-L1信号通路的激活可最大程度减少免疫反应对周围组织的损伤,避免自身免疫疾病的发生。而PD-1/PD-L1信号通路过度激活可使局部微环境T细胞免疫效应降低,从而介导免疫逃逸。目前已先后在肺癌、黑色素瘤、卵巢癌等多种疾病中对PD-1/PD-L1信号通路进行了广泛研究,发现其异常表达水平与肿瘤的免疫逃逸密切相关,相关免疫治疗药物也已在临床试验中取得一定效果。由此提出并通过实验验证假设:在内异症的发生发展过程中,子宫内膜及其所在的局部微环境中PD-1/PD-L1异常高表达,PD-1/PD-L1信号通路异常激活,使局部微环境T细胞的免疫效应降低,从而介导子宫内膜的异位种植、生长。本题拟从临床标本检测、体外细胞实验两个方面对PD-1/PD-L1在内异症中的表达情况进行研究。研究方法收集符合纳入条件的子宫内膜异位症患者(15例)术前血液标本、术中子宫在位内膜及异位内膜组织标本,及正常对照组患者(15例)血液、在位内膜标本。通过免疫组化、蛋白免疫印迹,定位、定量分析PD-1/PD-L1在组织中的表达情况。通过流式细胞学技术,检测其在血液淋巴细胞中的表达情况。并对子宫在位内膜进行分离、原代培养,予细胞因子:干扰素、肿瘤坏死因子,雌激素刺激,观察子宫内膜细胞PD-L1蛋白的表达变化。结果1、子宫内膜组织标本中可以检测到PD-1/PD-L1的表达,且PD-1和PD-L1蛋白在子宫内膜异位症在位和异位内膜中的表达水平均高于正常对照组在位子宫内膜;2、子宫内膜异位症患者外周血CD4+/CD8+T淋巴细胞表面PD-1/PD-L1的表达均高于正常对照组;3、子宫内膜异位症在位子宫内膜腺上皮细胞在雌二醇的刺激下PD-L1蛋白的表达增高。结论及意义1、PD-1/PD-L1信号通路在内异症中过度激活,其可能通过改变子宫内膜本身及其微环境中的细胞免疫水平,参与子宫内膜异位症的发生、发展;2、雌激素可以调节PD-1/PD-L1信号通路在内异症中的作用;3、为通过抑制PD-1/PD-L1信号通路等此类具有广泛应用前景的免疫检测及治疗策略治疗内异症提供新思路。