论文部分内容阅读
本研究以鸡IGF-I基因作为影响鸡生长性能和产蛋性能的候选基因,采用测序、PCR-SSCP和PCR-RFLP技术分析了该基因5’UTR核苷酸序列的变异,并研究IGF-I基因对京海黄鸡的生长性状的影响;对所发现的基因在京海黄鸡连续3个世代的遗传特性进行了研究,探讨多态性与生长性状的关系,挖掘新的有利于经济性状的基因座位,以及选育过程对IGF-I基因在世代间传递的影响。利用优良基因,最终通过标记辅助选择可以加速经济性状的改良速度和新品种的培育进程,从而为我国鸡的标记辅助选择提供新的有效的分子标记,积累有价值的参考资料。本论文得到的结论如下:利用测序、PCR-SSCP和PCR-RFLP技术分析了该基因5’UTR核苷酸序列的变异,共发现8个多态位点,其中7个SNP多态位点,一个小片段GAAAA的插入。7个SNP中5个为GA突变,一个CT突变,均为转换,一个AC突变属于颠换。按其所在DNA序列位置将突变位点命名分别为:G49754A、G49778A、G49824A、A49944C、G49961A、G50034A、DelGAAAA50077以及C50180T。G49754A、G49778A和G50034A位置突变分别导致Tru1I和TaiI和PstI酶切位点发生改变,并发现PstI酶切位点与Nagaraja等发现的PstI酶切位点为同一酶切位点。Tru1I和TaiI酶切结果及SSCP结果均显示G49754A和G49778A位点完全连锁,实验中将G49754A和G49778A位点看做一个位点记为G49754A/G49778A位点。PstI酶切时发现DelGAAAA50077位点的N等位基因总是与G50034A位点A等位基因同时出现,说明在京海黄鸡中G50034A位点的A等位基因和DelGAAAA50077位点的N等位基因可能为连锁。本文研究了京海黄鸡、尤溪麻鸡以及AA鸡中G49754A/G49778A、G50034A和DelGAAAA50077位点的基因型,表明外来鸡种AA鸡未检测到突变;G49754A/G49778A和G50034A位点在京海黄鸡和尤溪麻鸡中均以杂合型居多;DelGAAAA50077位点只有京海黄鸡中检测到。连锁不平衡分析结果显示京海黄鸡中G49754A与G49778A为完美连锁不平衡,G50034A与DelGAAAA50077位点间具有很强连锁不平衡,G49754A/G49778A与G50034A位点间达到了较强的连锁不平衡关系;G49754A/G49778A和DelGAAAA50077位点之间连锁不平衡则较弱。京海黄鸡中G49754A/G49778A、G50034A和DelGAAAA50077位点理论上应有8种单倍型组合,实际检测出有效单倍型(P>0.03)只有4种,其中又以AAGN、GGAN单倍型组合为主。通过IGF-I基因G49754A/G49778A、G50034A和DelGAAAA50077位点各基因型与产蛋性状的相关性分析发现,3个多态位点与300日龄产蛋数和平均蛋重均无显著影响(P>0.05)。与生长性状的相关性分析发现,G49754A/G49778A位点对初生重有显著差异外,对4、8周龄体重均无影响,12、16周龄以及300日龄体重中AA/AA基因型均大于其他基因型,可以推断在12周龄之后增重中A/A等位基因为优势基因。G50034A位点对初生重、4、8周龄体重均无影响, 12、16周龄以及300日龄体重中GG型均大于其他基因型,可以推断在12周龄之后增重中G等位基因为优势基因。DelGAAAA50077位点对初生重、4、8、12、16周龄以及300日龄体重中DD型均小于NN型和ND型,且NN型16周龄体重显著大于DD型。本文研究了G49754A/G49778A、G50034A、DelGAAAA50077、InsAA56493和G95852A位点(后2个位点为实验室之前发现的突变位点)连续3个世代的遗传规律,结果表明G49754A/G49778A、G50034A和G95852A位点基因型频率呈规律性变化。G49754A/G49778A位点AA/AA型频率由7世代0.234到9世代0.393,AA等位基因由7世代0.493增加到9世代0.628;G50034A位点的AA基因型频率由7世代0.291增加到9世代0.325,A等位基因在7世代的0.541增加到9世代0.573;G95852A位点GG型频率由7世代的0.110到9世代的0.308,G等位基因频率随着世代的增加由7世代0.344增加到9世代0.547。独立性检验表明:G49754A/G49778A、G50034A、InsAA56493和G95852A这3个位点3个世代之间基因型分布不是独立的,基因型频率分布与世代有关,而DelGAAAA50077位点基因型与世代变化无关。遗传多态性指标显示G49754A/G49778A、G50034A和G95852A位点出现规律性变化,而DelGAAAA50077、InsAA56493位点都未出现规律性变化。