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猪繁殖与呼吸综合征是一种对养猪业构成严重威胁的重要疫病,ELISA是目前进出境口岸使用的主要检测方法。动物检疫诊断试剂盒是动物检疫工作依靠的主要技术手段,规范、合格的诊断试剂盒是准确执行检疫任务、保证口岸把关有效性的前提,应用过程中出现的不同诊断试剂盒质量不一、检测结果不一致等问题,严重影响口岸把关的效率和准确性。本研究通过对猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体ELISA试剂盒诊断性能、分析性能、均一性的测定,初步形成了一套完整的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体ELISA试剂盒质量评价体系,为出入境口岸猪繁殖与呼吸综合征ELISA试剂盒的选择和使用提供了依据,为口岸其他检疫试剂盒的质量评价提供了参考。本研究选择了 5个品牌:美国爱德士生物科技公司(IDEXX Laboratories,Inc。简称IDEXX)、荷兰Biochek公司(Biochek)、重庆业为基生物科技有限公司(业为基)、法国LSI和深圳芬德生物技术有限公司(芬德),3个不同批次的猪繁殖与呼吸综合征ELISA抗体检测试剂盒,参考OIE、比利时和澳大利亚等对诊断方法进行确认和验证的文件,先利用已知感染状态的血清(OIE参考实验室提供)对5个品牌试剂盒进行了初筛,初步了解试剂盒的准确性,又利用采集的田间血清样品对通过初筛的试剂盒进行诊断性能的测定;再用参考血清(GD公司购买)对其分析性能和均一性进行了测定。测定的参数主要有:诊断敏感性(Diagnostic sensitivity,DSe)、诊断特异性(Diagnostic specificity,DSp)、分析敏感性(Analytical sensitivity,ASe)、重复性(Repeatability,Re)和再现性(Reproducibility,Rp)。结果如下:第一,不同试剂盒检测准确性比较结果。利用5个品牌试剂盒对18份状态已知的样品进行了测定,结果显示,芬德试剂盒测定不准确,正确率仅为61%,不能用于口岸检测,无需开展后续测定;其余4个品牌试剂盒测定准确率为100%。第二,不同试剂盒诊断特性比较结果。利用343份采集样品对诊断特性进行测定,以间接免疫荧光(IFA)结果为"相对金标准",4种试剂盒有55份出现差异,计算4个品牌试剂盒的诊断敏感性、诊断特异性和kappa值等参数,并绘制ROC曲线。结果显示,IDEXX的测定结果最接近于IFA的实验结果,4个品牌试剂盒诊断敏感性从高到低分别为业为基、IDEXX和Biochek、LSI,诊断特异性从高到低分别为IDEXX、LSI、Biochek、业为基。第三,不同试剂盒分析敏感性比较结果。将欧洲型和美洲型参考血清进行稀释,对4个品牌试剂盒进行分析敏感性测定,IDEXX和Biochek均为通用型检测试剂盒,而业为基和LSI均为美洲型检测试剂盒;分析敏感性高低依次为业为基、IDEXX、Biochek、LSI。第四,不同试剂盒重复性比较结果。利用参考血清由2个操作者对4个品牌试剂盒进行重复性测定,结果显示,4个品牌试剂盒普遍批间重复性差,批内重复性好,批间质量不稳定,方差分析显示批间差异是造成结果出现差异的主要因素。第五,不同试剂盒再现性比较结果。4个品牌试剂盒在三个不同实验室测定20份样品,除Biochek在不同实验室间变异系数达到21.99%外,IDEXX、业为基、LSI试剂盒在不同实验室间的变异系数均小于15%,再现性较好。临近效期的IDEXX试剂盒出现了对同一阴性样品检测结果出现差异的情况,显示阴性样品为阳性,说明试剂盒临近效期时不稳定,要谨慎使用。