海产品中蜂房哈夫尼菌的鉴定及特性研究

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sym1989
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蜂房哈夫尼通常被认为是一种条件致病菌,生存范围非常广,能够从人类和动物的肠道中分离获得,自然环境中的河流、海洋以及土壤中都可以检测到蜂房哈夫尼菌,食品中更是常见,冷藏的牛奶、肉制品以及鱼肉中都存在大量的蜂房哈夫尼菌。研究表明,蜂房哈夫尼菌能够令食品产生硫化氢,酸性气味,这也是导致食品腐败的原因。蜂房哈夫尼菌能够在低温环境中生长,所以对于低温冷藏的食品,蜂房哈夫尼菌的危害较大。因此,本文的主要目的是通过鉴定蜂房哈夫尼菌以及探究该菌的一些生物学特性,为以后清楚地认识并研究蜂房哈夫尼菌提供理论基础。本文用LB培养基分别从蜢虾酱中分离出5株蜂房哈夫尼菌(G1、G2、G3、G4和G5);从海参中分离出一株蜂房哈夫尼菌H4;从海鲈鱼中分离出一株蜂房哈夫尼菌L1;从鱼露中分离出一株蜂房哈夫尼菌Y1,通过研究该菌的形态学特性,生理生化特性以及16S rDNA分子序列对这8株菌进行鉴定。鉴定结果表明:该8株蜂房哈夫尼菌都为直杆状,呈光滑、灰色、表面光泽;生化鉴定结果也一致,革兰氏染色阴性;鞭毛染色阳性;动力实验阳性;氧化酶试验阴性;糖醇类发酵阳性产气;甲基红试验阳性;V-P试验阴性;吲哚试验阳性;ONPG试验阴性;硫化氢试验阴性。而用16S rDNA分子序列分析,8株菌的序列各不相同,通过建立系统发育树也可以看出同源性的差异,说明该8株菌在基因序列方面存在差异,为之后研究该8株菌的生物学特性差异提供基础。本文通过生长曲线试验、生物膜试验、泳动性试验、耐盐性试验和药敏性试验对这8株蜂房哈夫尼进行生物学特性研究分析。研究分析表明:在生长曲线试验中,分别研究了8株菌在7个温度梯度下(4℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃和35℃)的生长特性。之前有研究表明,蜂房哈夫尼菌的最适生长温度为30℃,由本文的生长曲线试验中可以发现,温度越高,蜂房哈夫尼菌生长越快。虽然蜂房哈夫尼在35℃条件下生长最快,但是衰亡期也会提前,在30℃条件下,生长较35℃稍缓,但其稳定期能够维持较长时间,因此,适宜在30℃条件下研究蜂房哈夫尼。由此得出30℃为蜂房哈夫尼菌的最适生长温度。在生物膜测定中发现只有G4菌株在144 h时形成了强生物膜;而L1的成膜能力在这8株菌中是比较弱的,在144 h和168 h时才形成了中强度生物膜,其他6株菌都为中强度生物膜。泳动是蜂房哈夫尼菌依靠鞭毛进行的运动,而鞭毛与生物膜的形成有紧密的关系。鞭毛的主要作用是帮助细菌克服物体表面张力使其附着于接触表面,有利于传染疾病和生物膜的形成。在泳动性试验中,这8株蜂房哈夫尼菌株都具有泳动性,并且在48小时达到最大值。在耐盐性试验中,从蜢虾中分离出的五株蜂房哈夫尼菌G1、G2、G3、G4和G5,还有海参中的一株H4最高耐盐量为5%,而海鲈鱼中的一株L1和鱼露中的一株Y1最高耐盐量为6%。在药敏试验试验中,做了8株蜂房哈夫尼菌的17种抗生素(分别为氯霉素、卡那霉素、氨苄霉素、庆大霉素、壮观霉素、克林霉素、四环素、红霉素、链霉素、环丙沙星、磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、氧氟沙星、呋喃西林、呋喃唑酮、甲硝唑和盐酸金霉素)的药敏试验。从整体来看,各株菌对同种抗生素的耐药性相差不大,但是对于氨苄青霉素的抗性,G1、G2、G3、G4和G5可以达到450μg/ml,L1和Y1为500μg/ml,而H4则为100μg/ml;对于庆大霉素,G1、G2、G3、G4和G5的耐药性为600μg/ml,而H4、L1和Y1为100μg/ml。接着我们对8株菌的腐败能力进行了测定,TVB-N试验中,在8株菌的作用下,随着时间的增加TVB-N值相应增加。其中G1、G2、G3、G4、G5和H4的TVB-N最大值没有超过30 mg/100 g,为轻度腐败;而L1的最大值为37 mg/100 g,Y1的最大值为48 mg/100 g,均超过了30 mg/100g,达到了严重腐败。在生物胺试验中,8株哈夫尼在96 h内均产生了腐胺和尸胺,除了H4菌株,其他菌株产腐胺和尸胺的量都随时间的增加而增加。但是,这8株菌产组胺的含量特别少,和腐胺、尸胺相差较大。另外这8株菌生物胺的产量,在24 h到96h之间均有显著性差异(p<0.05)。
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