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【目的】 探究miR-28-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用机制。 【方法】 体外培养非小细胞肺癌细胞株 A549、H1299，转染 miR-28-5p mimics 和inhibitor，qPCR验证其转染效率；用CCK8、平板克隆、流式细胞术、划痕试验、Transwell 迁移及侵袭实验等方法检测细胞增殖、克隆形成能力、细胞周期、迁移、侵袭等情况。通过qPCR、Western blot检测miR-28-5p靶基因RAP1B表达水平，并通过双荧光素酶实验进一步验证miR-28-5p靶向调控RAP1B的表达。 【结果】 用 qPCR 验证转染效率，转染 miR-28-5p mimics 的 NSCLC 细胞A549和H1299 的 miR-28-5p 相对表达量较对照组升高，转染 miR-28-5p inhibitor 的NSCLC细胞A549和H1299的miR-28-5p相对表达量较对照组下降，差异均有统计学意义。转染miR-28-5p mimics的 NSCLC细胞A549和H1299的OD 值较对照组降低，转染miR-28-5p inhibitor的 NSCLC细胞A549和H1299的OD 值较对照组升高，差异有统计学意义。转染miR-28-5p mimics的 NSCLC细胞A549和H1299的克隆形成数较对照组减少，转染miR-28-5p inhibitor的 NSCLC细胞A549 和 H1299 的克隆形成数较对照组增加，差异均有统计学意义。转染miR-28-5p mimics的 NSCLC细胞A549和H1299的划痕愈合率较对照组降低，转染miR-28-5p inhibitor的 NSCLC细胞A549和H1299的划痕愈合率较对照组升高，有统计学差异。转染 miR-28-5p mimics 的 NSCLC 细胞 A549 和 H1299的 Transwell 迁移和侵袭细胞数较对照组减少，转染 miR-28-5p inhibitor 的NSCLC细胞A549和H1299的Transwell迁移和侵袭细胞数较对照组增加，有统计学差异。转染miR-28-5p mimics的 NSCLC细胞A549和H1299出现G0/G1期阻滞，差异有统计学意义，而转染转染miR-28-5p inhibitor的 NSCLC细胞A549 和H1299细胞周期无显著差异，差异无统计学意义。转染miR-28-5p mimics的NSCLC细胞A549和H1299的Western结果提示RAP1B蛋白的表达水平较对照组降低，转染miR-28-5p inhibitor的 NSCLC细胞A549和H1299的Western结果提示RAP1B蛋白的表达水平较对照组升高，差异有统计学意义。双荧光素实验中RAP1B野生型组中miR-28-5p mimics组相对荧光表达量较野生型对照组降低，差异有统计学意义，RAP1B突变型实验组miR-28-5p mimics组相对荧光表达量较突变型对照组无显著差异，差异无统计学意义。 【结论】 miR-28-5p可显著抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移及侵袭，且其可能是通过抑制RAP1B发挥作用。因此miR-28-5p可能是抑制非小细胞肺癌发生发展的潜在靶点，为进一步进行动物实验提供实验基础。