以PAI-1为靶点的具有减肥作用的复方中药制剂的初步筛选

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目的:利用MTT及荧光定量PCR技术,以3T3-L1细胞系为工具,研究6种中药复方制剂对人纤溶酶原激活物抑制剂-1(Plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)基因表达的影响,观察不同浓度方剂制剂PAI-1mRNA的表达情况,了解其影响因素,探讨中药复方制剂在治疗肥胖症中的分子生物学机制。方法:1.制备6种不同中药方剂的水溶性提取物(Extracts of Chinese Medical Herbs,ECMH),体外培养3T3-L1小鼠前体脂肪细胞,分别以不同浓度(0.001、0.01、0.1、1、10)mg/ml的ECMH刺激3T3-L1前体脂肪细胞24h,通过细胞形态学和MTT法判断其对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响,并进行统计学分析,初步筛选出对细胞有影响但损伤较小的最佳药物浓度;2.采用实时荧光定量PCR(Realtime fluorescence quantitative PCR,RT-PCR)技术分别检测6种ECMH对小鼠3T3-L1前体脂肪细胞分泌因子PAI-1mRNA水平的影响,根据统计分析结果筛选可用于减肥的中药复方制剂。结果:1.ECMH刺激3T3-L1前体脂肪细胞24h后均使细胞发生形态变化,不同浓度ECMH均可不同程度地抑制3T3-L1前体脂肪细胞增殖。除小承气汤外,各方剂ECMH1mg/ml均为抑制率最高的浓度,与正常对照组相比,减肥胶囊、防风通圣散、防己黄芪汤、泽泻汤四方各浓度均具有统计学意义(P≤0.05),除参苓白术散10mg/ml,小承气汤100ug/ml、1ug/ml外(P>0.05),此两种复方其余各浓度均具有统计学意义(P≤0.05);2.RT-PCR技术检测得出,6种中药复方制剂3种不同浓度ECMH对脂肪细胞PAI-1mRNA表达均具有不同程度的促进作用。与正常组相比,防风通圣散、小承气汤、参苓白术散三种复方三种不同浓度均具有统计学意义(P≤0.05),泽泻汤1mg/ml,减肥胶囊10mg/ml、防己黄芪汤10mg/ml不具有统计学意义(P>0.05),此三方其余各浓度均具有统计学意义(P≤0.05)。结论:1、6种中药复方制剂不同浓度均可抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖。2.6种中药复方制剂均可促进3T3-L1前脂肪细胞PAI-1的表达,通过影响肥胖基因的表达,抑制脂肪细胞的分泌,达到减肥的目的。
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