【摘 要】
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目的探讨白芨多糖载紫杉醇纳米粒(BSP-PTX)对人肝癌Hep G2细胞体内及体外增殖、凋亡的影响以及其结合能力研究。方法1、以疏水改性的白芨多糖作为载体,搭载紫杉醇而制备呈纳米粒BSP-PTX;2、纳米粒的形态通过扫描电子显微镜进行观察,纳米粒的电位和粒径则通过马尔文粒度仪进行;3、采用四甲基偶氮唑蓝还原反应法(MTT法)测定BSP-PTX和PTX在1.0ng/ml,2.0ng/ml,4.0ng
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目的探讨白芨多糖载紫杉醇纳米粒(BSP-PTX)对人肝癌Hep G2细胞体内及体外增殖、凋亡的影响以及其结合能力研究。方法1、以疏水改性的白芨多糖作为载体,搭载紫杉醇而制备呈纳米粒BSP-PTX;2、纳米粒的形态通过扫描电子显微镜进行观察,纳米粒的电位和粒径则通过马尔文粒度仪进行;3、采用四甲基偶氮唑蓝还原反应法(MTT法)测定BSP-PTX和PTX在1.0ng/ml,2.0ng/ml,4.0ng/ml,8.0ng/ml,16.0ng/ml对Hep G2细胞生长影响;4、并且采用荧光染色的方法用荧光显微镜观察药物进入细胞的结合能力;5、流式细胞术测定BSP-PTX紫杉醇纳米微粒对Hep G2周期与凋亡的抑制作用;6、Western blot测定BSP-PTX对Hep G2相关凋亡蛋白Bcl2、bax、Caspase-3的影响;7、建立Hep G-2人肝癌细胞小鼠荷瘤模型,分为空白对照组、BSPPTX10mg/kg和15mg/kg组PTX10mg/kg和15mg/kg组,分析BSP-PTX对Hep G2体内生长的影响。结果1、扫描电子显微镜结果证实:本文构建的纳米粒子(载紫杉醇)具有典型的实球性。载紫杉醇纳米粒子在1mg/m L的浓度下其分散系数为0.062,Zeta电位为-25.1m V,Z均粒径为160.5nm,当对1mg/m L浓度的载紫杉醇纳米粒子进行10倍和100倍稀释后,PTXD的Zeta电位分别为-25.4m V和-26.2m V,Z均粒径分别为163.9nm和164.7nm,分散系数分别为0.124和0.237;2、BSP-PTX组的荧光信号与PTX注射液组相比明显增强,说明FITC标记的药物进入Hep G2细胞中,且BSP-PTX药物进入细胞中的量明显多于PTX注射液组,P<0.05;3、噻唑蓝(MTT)比色结果显示,载紫杉醇纳米粒子和常规紫杉醇注射液均可以对Hep G2细胞增殖产生明显的抑制作用,浓度越高抑制增殖的效果越显著;但BSP-PTX对细胞生长的抑制率明显高于PTX,P<0.05;4、与PTX对照组相比,BSP-PTX作用于Hep G2肿瘤细胞后,显著降低了G2/M期比例,同时肿瘤细胞明显被阻滞于G0/G1;BSP-PTX组对细胞的凋亡发挥明显的诱导作用,P<0.05;5、与常规使用紫杉醇的对照组相比,在作用于肿瘤细胞后,载紫杉醇纳米粒子实验组可以Bcl-2的表达水平下降,bax、caspase-3的表达水平上升,P<0.05;6、体内抑瘤试验结果证实,PTX10mg/kg和15mg/kg组、BSPPTX10mg/kg和15mg/kg组肿瘤抑制率分别为37.58%和45.0%,52.35%和69.80%;与空白对照组相比,给药组动物的平均体重明显下降,P<0.05;相同给药剂量下,BSP-PTX组动物肿瘤重量低于PTX组,P<0.05;BSPPTX15mg/kg组动物体重高于PTX组,P<0.05。结论1、本研究构建的BSP-PTX稀释稳定性较好,载紫杉醇纳米粒子呈现良好的实球性;2、与常规紫杉醇相比,本文构建的载药纳米粒具有更强的靶向肿瘤组织能力;3、BSP-PTX可以显著诱导Hep G2细胞的凋亡;4、BSP-PTX影响Hep G2细胞周期,并对凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3及Bcl-2的表达水平产生影响;5、白芨多糖载紫杉醇纳米粒体外及体内均可安全有效地抑制人肝癌Hep G2细胞株的增殖。
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