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阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)是由多种因素引起的一种缓慢进行性发展的神经退行性疾病,其典型病理标志主要有细胞外的老年斑(senile plaques,Sp)和细胞内的神经纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs)。由于患AD的人口急剧增加,AD的病因和病理机制尚不清楚,且目前仍无有效的治疗药物,这导致个人、家庭以及社会将面临着巨大的经济负担。神经炎症是AD发展的主要原因之一。小胶质细胞是中枢神经系统中重要的免疫细胞,时刻监控着中枢神经系统微环境的稳态,主要参与突触可塑性的调节、神经营养因子的调控及炎症因子的表达和释放等。研究表明AD患者大脑中炎症反应显著高于正常人,且存在大量过度激活的小胶质细胞。长期大量激活的小胶质细胞迁移至老年斑附近并释放炎症因子,损伤周围神经元,加重AD的认知障碍。因此,探究小胶质细胞在神经炎症过程中的作用机制可为治疗AD提供新的治疗靶点。全基因组关联研究表明髓样细胞触发受体2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2,TREM2)是仅次于APOE4的AD危险因子。其R47H突变体使患AD的风险明显增加。TREM2是一种选择性表达在髓系细胞表面的跨膜蛋白,在中枢神经系统主要表达在小胶质细胞表面,主要参与小胶质细胞的增殖、吞噬、存活、炎症因子表达等。TREM2的配体主要有磷脂、β淀粉样蛋白、载脂蛋白E和凋亡神经元等。配体与TREM2的相互作用激活DAP12从而调节下游信号通路,进而引起细胞内一系列反应。PI3K/AKT轴位于TREM2的下游,介导小胶质细胞的激活和炎症因子的表达。FoxO3a是AKT下游的重要分子并参与小胶质细胞的激活。最近研究发现石榴多酚(Punicalagin,PU)抑制FoxO3a/自噬信号通路进而抑制巨噬细胞释放炎症因子,而TREM2可通过抑制自噬进而抑制小胶质细胞表达炎症因子。因此,我们假设TREM2通过PI3K/AKT/FoxO3a信号通路,调节FoxO3a核移位,进而调控小胶质细胞介导的神经炎症反应。此课题的实验主要由体内和体外两部分组成。(一):体内检测PI3K/AKT/FoxO3a轴介导TRME2调节小胶质细胞参与的炎症反应。首先,我们检测炎症因子、炎症相关因子对6-7月龄5xFAD模型小鼠进行炎症反应评估。其次,使用立体显微注射方法将干扰TREM2的腺相关病毒注射至5xFAD小鼠海马DG区,利用蛋白质印迹、qPCR和免疫荧光方法探究敲除TREM2对5xFAD小鼠海马区神经炎症的影响,并检测PI3K/AKT/FoxO3a信号通路的变化,探究干扰TREM2对PI3K/AKT/FoxO3a信号通路的影响。(二)体外检测PI3K/AKT/FoxO3a轴介导TRME2调节小胶质细胞参与的炎症反应。首先,将过表达TREM2质粒转至BV2细胞,利用蛋白印迹及qPCR方法检测过表达TREM2对炎症反应及信号通路的影响。其次,使用免疫荧光技术检测TREM2对FoxO3a核移位和小胶质细胞类型转换的影响。总的来说,本实验结果表明TREM2通过P13K/AKT/FoxO3a信号通路失活FoxO3a,进而抑制小胶质细胞表达和释放炎症因子。本实验为理解TREM2参与AD的神经炎症提供新的见解,为AD的治疗提供潜在的治疗靶点。