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目的:探讨肝星状细胞中克隆蛋白Hydrogen peroxide-inducible clone 5在细胞学层面对肝细胞增殖的作用。方法:以购买的人肝星状细胞株LX-2及人肝细胞株HL-7702为研究对象;将实验分为三组:A.人肝细胞株单独培养组;B.人肝星状细胞LX-2细胞株与对照组人肝细胞HL-7702细胞株共培养组;C.Hic-5 si RNA人肝星状细胞HL-7702细胞株与对照组人肝细胞LX-2细胞株共培养组。沉默实验组人肝星状细胞株中Hic-5基因,将实验组B,C肝星状细胞株与对照组A肝胞株建立体外共培养体系。反复试验选取培养时间节点0 h,24 h,48 h,72 h。采用免疫荧光方法(Immunofluorescence technique,IF)检测Hic-5,α-SMA蛋白的表达进行活化肝星状细胞的鉴定及对Hic-5表达及分布的鉴定。以蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)方法检测不同时间点Hic-5和Collagen I(细胞外基质成分胶原蛋白I),cyclin D1蛋白(细胞增殖周期蛋白)表达情况以检测Hic-5基因随培养时间的变化及对Collagen I合成及肝细胞增殖的影响。采用免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)方法检测各组既定时间点内人肝细胞株HL-7702中ki 67的表达变化,采用Cell Counting Kit 8(CCK-8)方法检验肝细胞株存活率并绘制细胞增殖曲线,以探究Hic-5对肝细胞增殖的影响。结果:(1)IF法测得Hic-5在培养的人HSCs表达,且与α-SMA共表达于HSCs,随着HSCs的活化,Hic-5的表达逐渐增强。(2)WB法测得在同一实验组内,随着设置的时间点内培养时间的递增,Cyclin D1,Collagen I两者表达水平均逐渐提升。但在不同时间点内Hic-5 siRNA人肝星状细胞LX-2细胞株与人肝细胞HL-7702细胞株共培养组较人肝星状细胞株LX-2细胞株与人肝细胞HL-7702细胞株共培养组表达Cyclin D1的水平显著升高,差异有统计学意义,Hic-5 siRNA人肝星状细胞LX-2细胞株与人肝细胞HL-7702细胞株共培养组较人肝星状细胞LX-2细胞株与人肝细胞HL-7702细胞株共培养组表达Collagen I的水平显著降低,差异有统计学意义。(3)CCK-8法测得Hic-5 siRNA人肝星状细胞LX-2细胞株与人肝细胞HL-7702细胞株共培养组增殖曲线较人肝星状细胞LX-2细胞株与人肝细胞HL-7702细胞株共培养组显著升高,差异有统计学意义。免疫组化法测得,同人肝星状细胞与人肝细胞株共培养组比较,各组Hic-5siRNA人肝星状细胞株与人肝细胞株共培养组表达Ki-67的阳性细胞数较显著升高,差异有统计学意义,且随着培养时间递增,Ki-67的阳性细胞数亦呈递增。结论:(1)培养的细胞为人肝星状细胞,且Hic-5,α-SMA共表达于人HSCs,随着HSCs的活化,Hic-5的表达逐渐增强;(2)培养人肝细胞为活细胞,随培养时间递增,细胞周期蛋白Cyclin D1合成增加。(3)活化的肝星状细胞促进HGF分泌,且可能受到Hic-5调节。(4)Hic-5基因缺失可能减少collagenⅠ的合成或促其分解,同时Hic-5基因缺失可能促进人肝细胞增殖。