P450药酶代谢体系中纳米金的分离表征及其对2D6活性的影响

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随着纳米技术的发展,金纳米粒子被越来越多的应用到生物传感及医药领域中,在推动社会发展的同时暴露于人体及环境中的机率也随之增大,因此纳米金的安全性已成为一个现实性问题。位于肝脏的细胞色素P450酶系在催化药物生物转化过程中发挥着至关重要的作用。因此将两者结合运用体外代谢体系研究金纳米粒子与细胞色素P450酶的相互作用对于探讨纳米金的安全性问题具有一定的生物学意义。有机相-水相均相体系是生物学中应用最为广泛的体系,为了达到更加快速直接的分析有机物质(大部分被分析物的属性),减少基质效应等目的,在仪器分析前纳米金的前处理必不可少。另一方面在目前为止毛细管电泳由于其独特的优势,是分析生物大分子及分离纳米粒子最为常用并且有效的分析手段。基于上述原因,本文在无机盐诱导乙腈-水分相的基础上建立了一种相转移快速分离纳米金的生物样品简易净化方法;在上述前处理的基础上初步考察了纳米金对细胞色素P4502D6活性影响的浓度效应和尺寸效应;考察了毛细管电泳技术在细胞色素P450酶系和纳米金分离中的应用,为探讨二者相互作用机理提供一种方法学尝试。本论文的主要工作如下:1在无机盐诱导乙腈/水均相体系分相的基础上,建立了一种相转移快速分离纳米金胶体的生物样品简易净化方法。考察了氯化钠,氯化镁,硫酸镁,硫酸钠四种无机盐对小(5nm),中(50nm),大(100nm)三种尺寸纳米金胶体的聚沉程度影响;考察了孵育时间对无机盐诱导胶体金聚沉效果的影响;考察了无机盐加入量对此前处理效果影响;应用透射电子显微镜(TEM)及紫外-可见吸收光谱仪观察聚沉前后纳米金胶体的形貌变化。最后将该前处理方法应用于血清、肝药酶复杂生物体系中右美沙芬及其代谢产物去甲右美沙芬的定量测定,取得了令人满意的结果。2在上述方法的基础上,以右美沙芬为特异性底物,考察了5、7、10、20、50、100nm不同尺寸纳米金胶体在不同浓度下对细胞色素P4502D6酶活性影响。通过IC5o测定试验,发现纳米金对细胞色素P4502D6酶活性的影响呈现浓度依赖性特点,具有明显的尺寸效应,这对探讨纳米金对细胞色素P450酶的调节及其潜在毒性具有重要的参考意义。3以毛细管电泳为主要检测手段,建立了快速测定非那西汀,对乙酰氨基酚,右美沙芬,去甲右美沙芬的区带毛细管电泳测定方法;考察了场强放大进样在线富集技术对毛细管电泳灵敏度提高的影响;考察了纳米金在毛细管电泳中的分离行为。为深入探讨纳米金-细胞色素P450相互作用提供一种方法学尝试。
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