酿酒酵母不仅细胞内富含各种活性物质,而且其本身也可以作为工程菌产生活性物质。但是酵母具有很厚的细胞壁,细胞内的这些活性物质都被其包围着,为了更好地利用细胞内的这些物质资源,研究有效的破壁方法特别重要。关于破碎酵母的细胞壁的方法多集中于化学、物理和生物破壁等,但是它们都存在各种各样的缺点,如化学破壁不仅会使营养物质的结构受到破坏,同时还会对环境产生恶劣的影响;物理破壁时会产生很大的噪声污染;生物破壁时所需费用相对较高,而且单一使用呈现的结果并不是很好。目前,利用CRISPR/Cas9系统对酵母的基因进行编辑取得了非常显著的成果,可以用于酵母基因组的单个或多个基因的突变以及染色体的大片段缺失和基因插入等。因此,在本实验中,采用CRISPR/Cas9系统,探究目的基因在特定条件下对酵母细胞壁稳定性的影响。本实验对酿酒酵母SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因进行编辑,取得了如下结果:1.利用CRISPR/Cas9系统对酿酒酵母2.558菌株基因组中的SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因进行叠加编辑,获得突变株2.558-IV。2.探究温度对酿酒酵母突变株2.558-IV细胞壁稳定性的影响,实验表明,突变株经过48 h发酵后转移至38℃继续培养2 h,对细胞壁的影响较大,其稳定性较低,活性物质更容易释放。