论文部分内容阅读
为了区分核移植重组胚中所表达的U2afbp-rs基因是来源于父源还是母源的，我利用单核苷酸单链构象多态性(SSCP)方法检测KM、B6、Balb／c、129S1、C3H、DBA和A／J品系中小鼠U2afbp-rs基因的多态性，以检测出这些品系小鼠间可能存在的多态位点；利用细胞核移植技术将Nm3T3细胞核和孤雌桑椹胚单个卵裂球分别移植到去核MⅡ期受体卵母细胞中，通过免疫荧光染色后比较体外受精胚、孤雌胚、Nm3T3核移植重组胚和孤雌桑椹胚核移植重组胚附殖前各时期胚胎DNA甲基化水平的变化，以探明克隆胚细胞核去分化与DNA甲基化的相互关系：利用Real-time PCR技术检测体外受精胚、孤雌胚和孤雌桑椹胚核移植重组胚附殖前各时期胚胎中印记基因U2afbp-rs基因以及非印记基因eIF-4C基因表达量的变化，以探明小鼠卵细胞质对克隆胚细胞核中印记基因表达的调控。结果表明：1．尽管国外有文献报道了U2afbp-rs基因在C57BL／6J和PWK品系间存在着丰富的多态位点，但这些位点在本研究所检测的小鼠品系中并不存在多态性，提示U2afbp-rs基因可能在KM、B6、Balb／c、129S1、C3H、DBA和A／J品系小鼠中并不存在多态位点。2．体外受精胚中印记基因U2afbp-rs和非印记基因eIF-4C都正常表达，它们在小鼠ZGA时期都发生瞬时高表达。但在孤雌胚中，U2afbp-rs和eIF-4C基因都出现异常的表达模式，这可能是DNA甲基化与染色质结构改变的相互影响所导致的，染色质的重构在印记基因以及非印记基因的表达中都起着重要的调控作用。3．孤雌桑椹胚核移植重组胚中U2afbp-rs基因和eIF-4C基因的表达水平要显著低于对照孤雌胚，但其表达量变化规律与对照孤雌胚相同，说明了卵细胞质对供体核印记基因的表达具有一定的调控作用。4．NIH3T3体细胞核移植重组胚和孤雌桑椹胚核移植重组胚中供体核基因组DNA在核移植后无显著变化，说明了克隆胚基因组DNA的主动去甲基化不完全。