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实验目的:本课题在建立大鼠肠道菌群失调合并过敏性哮喘的基础上,予肺肠合治法的代表方剂加味升降散进行干预,通过对本动物实验的观察,选择与哮喘气道重塑相关的多项指标,探讨肺肠合治法对肠道菌群失调合并过敏性哮喘大鼠气道重塑的影响,为“肺与大肠相表里”脏腑相关理论寻找实证依据。 实验方法:以SD大鼠为研究对象,在抗生素诱导其肠道菌群失调模型基础上采用卵清蛋白(OVA)、氢氧化铝(Al(OH)3)混悬液在大鼠双侧胸部、腹股沟及腹腔进行注射和雾化吸入激发哮喘,建立肠道菌群失调合并过敏性哮喘大鼠模型。加味升降散干预后,通过肺、肠同步观察的研究思路,用病理学方法观察大鼠肺肠组织的病理形态变化,用ELISA法检测大鼠血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中TGF-β1、IL-17含量;用免疫组化法检测肺、肠内MMP-9、TIMP-1的含量与比值。 实验结果:1.行为学观察:与肠道菌群合并过敏性哮喘大鼠模型组相比,中药肺肠合治干预组大鼠呼吸困难、流涕、抓挠等症状有不同程度减轻;在饲养过程中,大鼠毛色光泽度、整体情况也较好; 2.组织病理形态显示,肺肠合治组大鼠肺内支气管壁及周围组织炎性细胞浸润、黏膜上皮损伤较模型组有减轻,各组肠组织内炎症反应及肠黏膜的损伤也较模型组有缓解; 3.肺功能实验中模型组呼吸频率(F)与正常对照组相比有显著增高(P<0.05)),每分钟通气量(MVb)、吸气流量峰值(PIFb)呼气流量峰值(PEFb)显著减小(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比较,肺肠合治组可降低大鼠F(P<0.05或P<0.01),升高MVb、PIFb、PEFb(P<0.05或P<0.01); 4.模型组鼠BALF及肠黏液中sIgA含量明显低(P<0.05或P<0.01)空白对照组;与模型组比较,阳性组及治疗组大鼠BALF及肠黏液中sIgA含量较模型组升高(P<0.05或P<0.01); 5.相关细胞因子水平 1)模型组大鼠血清及BALF中TGF-β1、IL-17含量明显高于空白对照组大鼠(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,阳性组及肺肠合治组对TGF-β1、IL-17有不同程度下调作用(P<0.05),具有显著性差异有统计学意义。 2)免疫组化结果显示:模型组与空白组比较MMP-9/TIMP-1比值失衡严重(<1);阳性组及肺肠合治干预组与模型组比较MMP-9水平升高缓慢、TIMP-1水平升高明显(P<0.05);对MMP-9/TIMP-1的比值接近正常,有显著调节作用。实验结论:肺肠合治法改善肠道菌群失调合并过敏性哮喘大鼠气道重塑的调节机制可能有二:其一,通过减少肺组织的炎性细胞的浸润,达到修复气道粘膜损伤,进而恢复损伤组织的结构;其二,调控TGF-β1、IL-17表达、降低肺组织中MMP-9、TIMP-1水平,调节MMP-9/TIMP-1比值趋于平衡,达早期拮抗气道重塑的作用。