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为了研究重组鸡白细胞介素-6（rChIL-6）蛋白在SPF鸡体内外活性相关性，从而为开发以rChIL-6蛋白为主要成分的基因工程免疫增强剂研究提供科学依据，本研究采用间接ELISA法和MTS法分别测定不同浓度的rChIL-6蛋白与抗rChIL-6单抗发生特异性免疫反应活性以及体外促鸡脾脏、外周血T淋巴细胞增殖活性；筛选出4个浓度的rChIL-6蛋白进行体内活性比较实验。将160只37日龄SPF鸡随机平均分为20组，进行以上4个浓度的rChIL-6蛋白对传染性法氏囊病毒（IBDV）灭活疫苗、活疫苗免疫增强实验研究；通过检测分析接种后不同时间实验组鸡的IBDV抗体水平、不同细胞因子（ChIL-2、ChIL-4、ChIL-6、ChIFN-α、ChIFN-γ）表达水平、脾脏和外周血T淋巴细胞增殖活性、外周血T淋巴细胞亚群含量等指标，筛选出可在鸡体内发挥好的免疫增强作用的rChIL-6蛋白最大稀释度。将48只130日龄SPF鸡随机平均分为6组，进一步实验通过皮下注射、滴鼻点眼途径将rChIL-6蛋白（以上实验筛选出的浓度，1:25倍稀释）与新城疫病毒（NDV）灭活疫苗、弱毒活疫苗同时接种后不同时间对鸡体抗NDV抗体水平、淋巴细胞亚群含量的影响，以比较rChIL-6蛋白对NDV灭活疫苗和弱毒活疫苗免疫增强作用的影响，及不同接种方式对NDV弱毒活疫苗免疫增强作用的影响。结果：rChIL-6蛋白可与抗rChIL-6单抗发生特异性免疫反应，其蛋白相对含量约为121.57pg/mL；稀释度≤1：212的rChIL-6蛋白具有明显促ConA刺激的鸡脾脏淋巴细胞增殖活性，其OD490值极显著高于细胞对照（P＜0.01），而稀释度≤1：25时，不同稀释度的rChIL-6蛋白与原液相比差异不显著（P＞0.05）；稀释度≤1：211时rChIL-6蛋白具有明显的促ConA刺激的鸡外周血T淋巴细胞增殖活性，且当稀释度为1：27时测定的OD490值达到峰值；相对而言，rChIL-6蛋白对鸡脾脏淋巴细胞的增殖活性显著高于外周血T淋巴细胞。与IBDV灭活疫苗、弱毒活疫苗对照组相比，7dpi~35dpi期间，筛选出4个浓度的rChIL-6蛋白（原液、1：23稀释、1：25稀释、1：27稀释）与IBDV灭活疫苗、弱毒活疫苗同时应用后均能显著提高IBDV抗体水平，提高ChIL-2、ChIL-4、ChIL-6、ChIFN-α和ChIFN-γ在鸡体内的表达水平，提高鸡脾脏和外周血T淋巴细胞增殖活性、CD4+/CD8+比值；与PBS对照组相比，不同浓度rChIL-6蛋白对照组均能显著提高鸡体ChIL-2、ChIL-4、ChIL-6的表达水平，但对ChIFN-α、ChIFN-γ表达水平无明显影响（P>0.05）；可显著提高鸡脾脏和外周血T淋巴细胞增殖活性、CD4+/CD8+比值；稀释度≤1：25的rChIL-6蛋白以上各项检测指标与原液相近，但1：27倍稀释的rChIL-6蛋白显著低于原液；相对而言，rChIL-6蛋白与IBDV灭活疫苗共同使用组鸡的以上各项指标优于与弱毒活疫苗组共同使用组鸡，rChIL-6蛋白与IBDV弱毒活疫苗分开使用组鸡的以上各项指标稍优于与rChIL-6蛋白弱毒活疫苗混合使用组。与NDV灭活疫苗、弱毒活疫苗对照组相比，7dpi~42dpi期间，稀释度为1：25的rChIL-6蛋白与NDV灭活疫苗、弱毒活疫苗同时应用后均能提高NDV1~3个HI抗体滴度；7dpi~35dpi期间，均能显著提高鸡脾脏和外周血T淋巴细胞增殖活性。相对而言，rChIL-6蛋白与NDV灭活疫苗共同使用组鸡的NDV抗体滴度、鸡脾脏和外周血T淋巴细胞增殖活性等指标优于弱毒活疫苗组；rChIL-6蛋白与NDV弱毒活疫苗分开使用组鸡的以上各项指标稍优于弱毒活疫苗组混合使用组。结论：rChIL-6蛋白在体外可与抗ChIL-6单抗发生特异性免疫反应，具有显著的促鸡脾淋巴细胞增殖活性和较弱的促PBLC增殖活性。不同浓度的rChIL-6蛋白在机体内与IBDV、NDV灭活疫苗和弱毒活疫苗同时应用后均可通过增强外周血T淋巴细胞和脾脏淋巴细胞增殖活性，提高机体Th1、Th2型细胞因子的表达水平，提高CD4+/CD8+比值等方式发挥细胞和体液免疫增强作用。rChIL-6蛋白对鸡体液免疫的增强作用相对高于细胞免疫，对灭活疫苗的增强作用相对高于弱毒活疫苗，与活疫苗同时分别接种的免疫增强效果稍高于与疫苗混合后接种。rChIL-6蛋白的体内外活性具有相关性，最大稀释度为1：25的rChIL-6蛋白对机体的免疫增强作用与原液相近；体外活性的检测结果可用于体内使用剂量选择的依据。