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该论文在本实验室之前的研究基础上,对采用不同生物法(细菌发酵转化、真菌发酵转化以及酶水解法)制备黄姜薯蓣皂素进行了研究。选取其中转化效果最好的酶水解法,利用黄姜薯蓣皂苷酶对黄姜薯蓣皂苷进行结构改造,将带有糖基的黄姜薯蓣皂苷{3-O-α-L-(1→4)-鼠李糖基,[3-O-α-L-(1→2)-鼠李糖基]-β-D-葡萄糖基-薯蓣皂苷元}水解成不带糖基的黄姜薯蓣皂素即薯蓣皂苷元。对这种酶进行分离纯化,测定其分子量,并对酶性质进行了研究。酶反应产物通过大孔吸附树脂分离纯化,采用高效液相色谱检测纯度,并推测反应过程。为得到黄姜薯蓣皂苷底物,首先采用醇提取法,从1000g黄姜根茎中提取到黄姜薯蓣总皂苷31.5g,得率为3.15%。经TLC检测,其中主要含有单糖基薯蓣皂苷,还有含量较少二糖基薯蓣皂苷及三糖基薯蓣皂苷。TLC所使用的展开剂为氯仿：甲醇：水=7：3：0.5,显色剂为10%的硫酸。然后比较了细菌发酵转化、真菌发酵转化以及传统的酶水解法转化黄姜薯蓣皂苷成为皂素。细菌发酵转化其最高的转化率仅为20%,并且使薯蓣皂苷侧链糖基数量增加；真菌发酵转化水解薯蓣皂苷侧链糖基效果不理想,转化率仅达到30%；但是,酶水解法定向转化薯蓣皂苷成薯蓣皂素的效果最佳,转化效率高达81%,是一种高效的转化方法。酶水解法转化黄姜薯蓣皂苷成为皂素过程中,利用真菌sp.42d菌种进行发酵培养,培养时诱导物黄姜的最适浓度为15%。发酵粗酶液经DEAE-Cellulose DE52柱梯度洗脱,在KCl盐浓度为180mmol/L时,洗脱出具有黄姜薯蓣皂苷酶活性的蛋白。提纯蛋白采用TLC和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行活性及纯度检测,其中SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱显示为一单带,确定其为黄姜薯蓣皂苷酶,测定分子量约为35kDa。对提纯的酶性质进行研究,结果确定黄姜薯蓣皂苷酶作用的最佳底物浓度为10mg/mL、最佳酶反应时间为24h；最适pH值为5.0；最适温度为35℃。在对酶反应条件进行优化后,黄姜薯蓣皂苷转化为黄姜薯蓣皂素的转化率为85%。按照最优化条件制备1升底物,得到发酵产物7g。对酶解产物薯蓣皂素进行分离提纯。5g酶解产物经AB-8大孔吸附树脂脱糖后,得4.59g,样品损失率为8.1%。然后经D-280大孔吸附树脂脱色,得到3.52g,样品损失率为23.3%。最后使用高效液相色谱检测产物薯蓣皂素纯度,薯蓣皂素中有一定量的杂质。通过比较底物薯蓣皂苷与产物薯蓣皂素的图谱,分离得到的黄姜薯蓣皂素纯度为96.9%。