基于激光诱导前向转移技术制备蛋白微阵列的研究

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以激光诱导前向转移技术(LIFT)为基础的生物打印技术(又称生物激光打印技术,Bio LP)能够将极微量的含生物材料的溶液精确打印在不同的位置而不致活性受损,是一门新兴的生物打印技术。由于该技术本身具有非接触性、方向性好、激光能量密度高等独特优势,克服了常规微阵列制备方式,如微针点样或喷墨打印技术分辨率低、喷嘴∕针孔易堵塞、样品易污染等问题,使得它在常规微阵列制备技术面前极具竞争力。本文将详细描述利用激光诱导前向转移技术制备微阵列的机理∕设备,并探索激光诱导打印过程中的关键技术及相关参数的设置对打印结果的影响,进行蛋白质微阵列结构的构建,并应用于非均相免疫分析,以期探寻蛋白质组学的新机制和新策略。首先论文介绍了生物激光打印技术的国内外现状,系统分析了生物激光打印技术应用蛋白质微阵列制备的技术可能和重大意义。接着详细介绍了基于激光诱导前向转移的生物激光打印技术的原理及系统组成。然后,根据生物激光打印技术中激光吸收层的特性要求,选择了钛膜作为激光吸收层。采用四种不同方法在载玻片上制备50μm~100μm厚度的钛膜,并对薄膜的表面形貌、结构及晶型等性质进行了较为系统的研究,最终获得生物激光打印技术中钛膜的最佳制备方法和适合形成生物墨水薄膜的处理技术。其次,利用搭建好的生物激光打印平台进行打印蛋白质微阵列的探索研究。打印过程中设置不同参数,主要包括溶液粘度、生物墨水厚度及接收基片修饰方法对打印结果的影响,并分析各参数与沉积点尺寸、沉积效果的关系及变化规律。结果发现,溶液的粘度增加或液体薄膜的厚度减小均可使液滴逐渐变小,最小可以得到直径15μm的液滴。最后,在优化参数条件下,用生物激光打印平台打印65μm人Ig G微阵列,经BSA封闭后与Cy5荧光标记的兔抗人Ig G进行非均相免疫反应,通过倒置荧光显微镜检测打印后抗体的活性,结果显示,运用生物激光打印技术制备的人Ig G微阵列仍保持活性,且可以应用于非均相免疫分析。此外,结合CAD构图软件进一步拓展对生物激光打印在生物材料图案化的研究,构建出了特殊字母样微阵列图形。研究表明,以激光诱导前向转移技术为基础的生物激光打印技术与生物材料图案化相结合,构建的蛋白质微阵列在生命科学领域有巨大的应用价值。
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