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背景及目的弥漫大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B-cell lymphoma， DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤亚型中发病率最高的亚型，约占成人非霍奇金淋巴瘤的30%-40%，是一组具有高度侵袭性及伴高度异质性的恶性肿瘤。根据免疫表型分为生发中心B细胞样亚型(germinal center B-cell like, GCB)、活化B细胞样亚型(activated B-celllike, ABC)和第三型， GCB型预后明显好于其他两种亚型。随着CD20分子靶向药物利妥昔单抗联合经典化疗方案的免疫学疗法展开，显著提高了DLBCL患者的完全缓解率和无病生存率，但是仍有一部分患者对免疫学疗法不敏感或早期复发。高三尖杉酯碱（homoharringtonine,HHT）系从粗榧类植物总生物碱中提取出的一种生物碱，是我国自主研发成功的高效抗肿瘤药物。目前临床主要用于急性髓系白血病、慢性粒细胞白血病和骨髓增生异常综合症的治疗。体外研究发现HHT对多种肿瘤细胞具有诱导凋亡作用，而HHT作用于DLBCL的研究目前尚无相关报道。本实验通过将HHT作用于DLBCL细胞株，观察作用前后DLBCL细胞形态和功能的变化，探讨HHT体外对DLBCL细胞的增殖、分化及端粒酶活性的影响，同时比较GCB和ABC亚型间反应差异，证实HHT具有抗DLBCL的作用，丰富了HHT的抗肿瘤作用谱，为临床开展HHT作为单药或联合其他药物用于DLBCL的治疗提供理论依据和实验室资料。方法1、将不同浓度、不同时间HHT作用于SU-4、LY-3细胞株，AnnexinV/FITC双标法流式检测细胞凋亡率。瑞氏染色观察细胞形态。并以相同浓度HHT作用于MCF-7、SGC-7901、Kasumi-1、K562细胞进行不同作用时间细胞凋亡率比较。2、将20ng/ml的HHT作用于SU-4、LY-3细胞株，流式细胞术检测不同作用时间的细胞周期变化。3、将20ng/ml的HHT作用于SU-4、LY-3细胞株，流式细胞术检测不同作用时间细胞表面抗原CD19、CD138、IgD及IgM的表达变化。4、将20ng/ml的HHT作用于SU-4、LY-3细胞株，TRAP-银染法测定不同作用时间细胞端粒酶活性变化。结果1、 HHT作用于DLBCL细胞株后呈现明显的剂量、时间依赖性，且ABC亚型较GCB亚型凋亡明显（P＜0.01）。相同浓度HHT作用于MCF-7、SGC-7901细胞株未见明显凋亡作用。作用于K562细胞48h凋亡率为46.0767±3.7792，Kasumi-1细胞24H、48H后凋亡率分别为59.4867±1.4009、74.0567±3.88472。2、浓度为40ng/ml HHT作用两种细胞株24h后细胞均出现明显形态改变，细胞明显缩小，细胞核固缩，胞浆内近膜处有空泡，凋亡小体明显增加。3、浓度为20ng/ml HHT作用于DLBCL细胞株不同时间后G0/G1期峰前均出现亚二倍体凋亡峰，24h、48h时表现为明显的G0/G1期阻滞。4、随着作用时间的延长DLBCL细胞株CD138、IgM、IgD阳性率逐渐增加，HHT作用两种细胞株12h、24h、48h后CD138、IgM的阳性表达与空白对照组比较差异显著（P＜0.01）。5、随着HHT作用时间的延长，端粒酶活性逐渐减弱，特别是在HHT作用48h时，ABC亚型端粒酶活性明显丧失，相较于GCB型抑制明显。结论1、 HHT对DLBCL细胞株具有明显的促凋亡作用，呈时间、剂量依赖性，ABC亚型敏感性强于GCB亚型。与其他肿瘤相比，相同作用浓度的HHT对DLBCL具有较强的促凋亡作用。2、 HHT主要作用于DLBCL细胞株的S期、G0/G1期，使细胞周期阻滞在G0/G1期。3、 HHT能刺激DLBCL细胞CD19+/CD138+、IgM+/IgD+阳性表达，诱导DLBCL细胞向末端B细胞分化。4、 HHT能通过下调细胞端粒酶活性起到抗肿瘤作用。