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随着社会的进步,国民收入的提高,人们对猪肉产量及品质的需求越来越高。通过遗传育种的方式提高猪肉产量和品质,具有重要的意义。研究骨骼肌发育的遗传学和表观遗传学基础是一个重要的方面,且是目前该领域的研究热点。骨骼肌是猪重要的代谢组织且含量丰富。在骨骼肌的发育过程中存在一些重要的调控网络,涉及很多重要的调控基因。这些调控基因包括编码基因以及大量的长非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)。有研究报道lncRNAs在胚胎发育、组织分化、器官形成等方面发挥重要作用,但关于lncRNAs在肌肉生长发育过程中的功能研究相对较少。本研究较系统地揭示出一个新鉴定的基因间长非编码RNA(long intergenic non-coding RNA,lincRNA)TCONS00026800在骨骼肌卫星细胞增殖分化过程中的表达规律,并对肌肉发育过程中TCONS00026800启动子甲基化水平、转录调控规律进行研究,以期获得该lincRNA对猪骨骼肌卫星细胞增殖分化的表观调控模式,为其在猪骨骼肌发育的功能研究奠定理论基础。主要取得以下结果:(1)通过分析国内外猪种肌肉RNA-Seq数据,并从中筛选出一个差异表达的lincRNA TCONS00026800。实时定量PCR结果显示TCONS00026800在胚胎期35D大脑组织内表达水平显著高于心、肝、肾和肌肉组织;TCONS00026800在猪骨骼肌卫星细胞增殖期(6 h–42 h),其表达水平逐渐升高;在分化期(6 h–24 h),其表达水平逐渐降低。(2)利用RACE技术获得TCONS00026800的全长序列并显示该lincRNA包含2个转录本V1与V2。其中V1全长为1638 bp,包含3个外显子;V2全长为1798bp,包含2个外显子;该lincRNA无蛋白编码能力;核质分布结果表明TCONS00026800主要分布于细胞质中。(3)双荧光实验结果表明,TCONS00026800的核心启动子位于其第一外显子上游33 bp–376 bp。转录因子结合预测结果显示该核心启动子与肌肉相关转录因子MyoD与MyoG结合;突变实验显示,三个突变位点的荧光值显著降低。双荧光及定量分析结果表明,分别转染MyoD与MyoG后,TCONS00026800的荧光值与表达水平均显著提高。(4)在成年梅山猪(n=3)与成年大白猪(n=3)骨骼肌中,TCONS00026800的核心启动子区,共有44个CpG位点,其中最后一个CpG位点发生甲基化,其余43个CpG位点都未发生甲基化(品种间无差异);在胎儿期45D与成年大白猪各组织(心、肝、肾、大脑、小脑、肌肉)中,该基因的甲基化模式也是如此。(5)利用实时定量PCR技术研究敲低TCONS00026800基因后对MSTN与TBX3、TCONS00026800邻近基因、骨骼肌卫星细胞增殖与分化的影响。研究结果显示在敲低TCONS00026800后,在卫星细胞分化24 h与36 h时,MSTN表达水平显著升高;在卫星细胞增殖30 h与分化36 h时,TBX3表达水平显著降低;在卫星细胞增殖24 h与分化36 h时,TCONS00026800的邻近基因COMMD5表达水平显著降低。TCONS00026800能够抑制骨骼肌卫星细胞增殖,但对骨骼肌卫星细胞分化影响不大。结论:1.TCONS00026800具有2个转录本V1与V2。其中V1全长为1638 bp,包含3个外显子;V2全长为1798 bp,包含2个外显子。2.TCONS00026800主要分布与细胞质中。3.MyoD与MyoG协同调控TCONS00026800的表达。4.TCONS00026800可以抑制猪骨骼肌卫星细胞的增殖。