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特定的蛋白由特定的基因编码，因此形成特定的高级构象，进而决定了特定的蛋白质具有特定的蛋白免疫反应。但目前，蛋白质之间的免疫交叉反应非常普遍，即使单克隆抗体也不能完全避免。并且免疫交叉反应通常缺乏重复性，导致人们很难研究其中的原因。 本实验室在研究GO为何具有不同pl时发现，富含苯丙氨酸的碱性短肽(Abasicphenylalanine-richoligo-peptide，BOP)通过离子键和疏水作用与乙醇酸氧化酶相结合，形成GO-BOP复合体(GO-BOPcomplex)GC。在本实验室以前结果的基础上，本文再次证实了BOP在SDS-PAGE中先向负极泳动，再向正极泳动，与亚基或者自身不规则结合，从而引起免疫交叉；并且也探索了消除BOP所致免疫交叉的方法。 经SDS-醋酸纤维薄膜电泳证实，BOP可先向负极泳动，再向正极泳动。GC在放置不同时间后，呈现不同SDS-PAGE结果，整个分离胶呈现出许多横贯凝胶的蓝色BP带，并与点样位置无关。本文还发现，蓝色浓缩胶中也含有BOP，利用它制备的相应BP抗体能识别含BOP的蛋白亚基。Rubisco54kDa带经电洗脱后，SDS-PAGE出现了66kDa等条带，推测为54kDa与BOP的复合体。 已经证实，BOP富含苯丙氨酸，具有很强的疏水性，尝试通过萃取破坏亚基与BOP之间的化学键，使亚基与BOP解离。结果发现萃取并未解离出BOP，BOP仍存在萃取水相中。证实了萃取条带中含BOP，在泳回正极时可与亚基结合成复合体。 同种蛋白具有特定的构象，与同一抗体表现出来的免疫反应应该是特定的。若免疫交叉是BOP所引起的，同种蛋白必定可以结合或者不结合BOP，将会出现被识别BOP的抗体识别与不识别两种情况。本文发现，GC抗体可以识别和不识别BSA和粗蛋白，并在不识别的蛋白的NC膜背面有BOP穿透的痕迹，即在NC膜正面出现空斑，相应亚基背面出现印迹反应。膜正面本底较深，可能是由于电泳中BOP泳向负极后均布于胶上，经转移到了膜正面。 对Marker各成分进行SDS-PAGEwesternblot时，发现GC抗体可识别出现印迹，说明Marker中也含有BOP，从而出现免疫交叉。 从SDS-PAGE前裂解样品中得到启发，通过从4％SDS水溶液入手，探索众多细节，包括处理温度和时间等环境条件、适用转移的蛋白载体膜、处理效果最好的表面活性剂类型等等。最终，确定了以NC膜作为蛋白转移载体，使用4％SDS溶液通过100℃处理5min到10min，能够较大程度地去除蛋白亚基上的BOP，达到消除BOP所引起的免疫交叉的目的。 同样的提纯方法得到的三批高酶活的GC，经SDS-PAGE后得到GO40kDa亚基，以其作为抗原制备的三次抗体，对粗蛋白和GC作免疫印迹，效果相似但不完全不同： (1)40kDa1抗体的免疫效果相当于GC抗体，既能识别亚基-BOP复合体，也能识别GO40kDa亚基。它还与之前的亚基-BOPP相类似。 (2)40kDa2抗体微弱地识别rbcL-BOP，清楚识别GO40kDa带，表现出很强的免疫特异性。 (3)40kDa3抗体未能识别GO40kDa亚基，但可识别含有BOP的其他蛋白质，如菠菜粗蛋白、Marker、BSA等。它还与之前的亚基-BOPw抗体相类似。 本文通过以上对GO与BOP无规律结合的研究，证实了BOP的存在、及其先向负极泳动再向正极泳动的特殊性质，呈现了BOP不规则结合引起免疫交叉；在消除免疫交叉实验中有所成效，增强了免疫反应特异性，为解释蛋白质之间的免疫交叉提供一定的思路和可借鉴的方法。