目的:子宫颈鳞癌是最常见的女性恶性肿瘤,占女性生殖系统恶性肿瘤的半数以上;它严重威胁着妇女的健康和生命。针对子宫颈鳞癌的发生机制,国内外学者的研究方兴未艾。从蛋白水平研究子宫颈鳞癌发病机制,对子宫颈鳞癌的临床诊断、鉴别诊断及指导临床治疗,具有十分重要的意义。Twist是存在于果蝇、鼠、人等生物体内的一种碱性螺旋-环-螺旋(Basic helix-loop-helix, bHLH)转录因子,主要表达于胎盘、胚胎中胚层和成人的某些中胚层来源的未分化组织。Twist属于高度保守的转录因子,是上皮-间质转变过程中的关键调控因子,对肿瘤的侵袭和转移有重要影响。人Twist基因位于7p21.2,含有2个外显子和1个内含子。Twist参与了某些上皮来源的肿瘤细胞发生上皮-间质分化(epithelial-mesenchymal transition, EMT),并促进其侵袭转移。p53基因是一种细胞周期的负调节因子,突变使其丧失正常功能,可导致肿瘤的形成。p53基因在细胞生长期作为一种转录调节因子具有重要的调节作用。Twist能够与p53启动子上的重要反式激活子HOXA5相互作用,并调节其活性。Twist还通过减少p53的上游调控子p14ARF的表达而影响p53的稳定,并且能够阻止p53翻译后修饰,如丝氨酸的磷酸化,而这种修饰作用对p53的激活是不可缺少的。MDM2是从一个含有双微体(murine double minute,MDM)自发转化的BALB/3T3DM细胞中克隆出来的,它是一个高度扩增的、进化上比较保守的癌基因,能自发地导致肿瘤发生。MDM2基因的扩增可导致p53基因失活。在调节细胞分裂、增殖方面,p53和MDM2之间存在相互调控作用。本课题采用组织芯片技术及免疫组化方法检测Twist、p53和MDM2三种相关基因在宫颈不同程度病变中的表达情况,分析Twist、p53和MDM2的异常表达在子宫颈鳞癌的发生、发展中的相互关系,探讨Twist、p53、MDM2与子宫颈鳞癌临床指标之间的相互关系。这对于了解子宫颈鳞癌的发病机制,提高子宫颈鳞癌的诊断准确率有重要意义。方法:1收集河北省人民医院病理科2007年8月～2008年8月宫颈组织共168例,其中子宫颈浸润性鳞癌44例,CIN组织96例(CINⅠ,34例;CINⅡ,30例;CINⅢ,32例),正常宫颈组织28例。2应用组织芯片技术及免疫组织化学方法(SP法)检测子宫颈鳞癌、CIN组织及正常子宫颈鳞状上皮组织中Twist、p53及MDM2蛋白的表达。3采用SPSS13.0统计软件进行统计学处理,以α=0.05为检验水准。结果:1组织芯片结果按课题需要共制作芯片5张,(6×5,1张;7×5,4张),有3个位点缺失,14个位点组织无意义,其他位点均可见足够的组织结构。最终样本共151例,其中子宫颈鳞癌组40例,CIN组85例(CINⅠ,30例;CINⅡ,26例;CINⅢ,29例),正常宫颈组织26例,组织位点的形态可观测率在89.88%。HE染色均匀,无脱片、异位和皱折,显示组织着色良好。免疫组织化学染色,阳性定位清楚,背景干净,无掉片现象。2 Twist在子宫颈上皮不同病变中的表达在CIN和子宫颈鳞癌病例中,无论是基底层还是其他病变各层均可见细胞质/核强阳性表达,子宫颈鳞癌(50.0%)及CINⅢ(48.3%)、CINⅡ(42.3%)、CINⅠ(10.0%)均明显高于正常宫颈鳞状上皮(0%)中Twist的表达,差异具有统计学意义(P<0.05);Twist表达在子宫颈鳞癌中明显高于CINⅠ(P<0.05);子宫颈鳞癌和CINⅢ、CINⅡ之间差异无统计学意义(P>0.05)。CINⅢ、CINⅡ与CINⅠ之间Twist的表达差异有统计学意义(P<0.05)。3 p53在子宫颈上皮不同病变中的表达在正常宫颈鳞状上皮中,p53不表达,从正常子宫颈鳞状上皮(0%)、CINⅠ(10.0%)、CINⅡ(46.2%)、CINⅢ(51.7%)到子宫颈鳞癌(52.5%),p53表达阳性细胞逐渐增多。p53在子宫颈鳞癌及CINⅢ、CINⅡ中均高于正常子宫颈鳞状上皮中的表达,差异具有统计学意义(P<0.05);p53在CINⅠ中的表达与子宫颈鳞癌、CINⅢ、CINⅡ差异均有统计学意义(P<0.05),但子宫颈鳞癌与CINⅢ、CINⅡ之间差异无统计学意义(P>0.05)。4 MDM2在子宫颈上皮不同病变中的表达在子宫颈鳞癌中MDM2强阳性表达(60%),明显高于正常子宫颈组织(0%);CINⅠ(26.7%)、CINⅡ(50%)、CINⅢ(56.7%)明显高于正常子宫颈组织(0%),差异具有统计学意义(P<0.05)。子宫颈鳞癌、CINⅢ、CINⅡ与CINⅠ之间MDM2阳性率差异具有统计学意义(P<0.05)。但在子宫颈鳞癌和CINⅢ、CINⅡ之间MDM2表达差异无统计学意义(P>0.05)。5子宫颈鳞癌中Twist、p53、MDM2之间的相关性分析在子宫颈鳞癌中Twist与p53表达具有显著正相关性(P<0.05,r=0.683);Twist与MDM2表达具有显著正相关性(P<0.05,r=0.363);p53与MDM2表达具有显著正相关性(P<0.05,r=0.454)。6子宫颈鳞癌中Twist、p53蛋白、MDM2表达与年龄、肿瘤大小、分化程度、临床分期、淋巴结转移情况及病理分级之间的关系Twist、p53、MDM2与临床分期、年龄、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移情况及病理分级之间均无明显相关性(P>0.05)。结论:1 CIN组及子宫颈鳞癌中Twist、p53及MDM2表达均明显高于正常子宫颈鳞状上皮,提示Twist、p53及MDM2可以辅助诊断子宫颈上皮是否存在CIN及鳞癌病变。2 CINⅡ、CINⅢ组及子宫颈鳞癌中Twist、p53及MDM2的表达均明显高于CINⅠ,提示三种指标可以辅助区别CINⅠ与CINⅡ、CINⅢ及子宫颈鳞癌,可以指导临床采取正确的治疗方法。3子宫颈鳞癌中Twist、p53和MDM2蛋白表达,两两之间有正相关关系,说明Twist、p53和MDM2蛋白对于子宫颈鳞癌的发生均有促进作用,三者有协同作用。4 Twist、p53与MDM2表达与其他临床病理因素之间均不存在相关性,说明这三项指标无推测临床分期、判断预后作用。