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目的: 观察针刺靳三针头穴对宫内窘迫HIBD大鼠大脑皮质中与神经细胞凋亡相关的NGF和Bax的影响,探讨早期针刺靳三针头穴对治疗小儿脑瘫的相关机制,为临床提供客观科学依据。 方法: 本实验分两个部分,首先模拟宫内窘迫(窒息)建立HIBD大鼠模型。将已明确预产期的妊娠雌性SD大鼠42只,分为正常组6只,假手术组3只,造模组16只,代乳鼠组19只。对造模组行延迟剖宫产术,用血管钳夹闭双侧上下子宫角血管,缺氧缺血5min;假手术组行剖宫产,不夹闭子宫角血管;正常组自然分娩。通过比较模型组和对照组新生大鼠出生时的表现、第2天生理反射和21d脑组织HE染色结果来鉴定造模是否成功。 随后利用上一个实验造模成功的新生HIBD大鼠完成靳三针头穴对宫内窘迫HIBD大鼠大脑皮质NGF和Bax影响的研究。将新生14d的SD大鼠按上一个实验的组别进行随机挑选,分为正常组、造模组、针刺1组、针刺2组,其中针刺1组和针刺2组的新生大鼠来自上个实验的造模组。对针刺1组、针刺2组行针刺治疗,每天针刺靳三针穴组中的“脑三针”、“颞三针”(双侧)、“智三针”。各组别大鼠按实验要求分别于出生后21天、28天、35天、42天、49天断头取脑组织检验,通过免疫组化检测各组脑组织中NGF和Bax的表达。 结果: 实验一: (1)新生大鼠21d死亡率:正常组5.13%,假手术组6.82%,造模组14.66% (2)出生时表现:正常组:出生即全身呈现较深的粉红色,在雌鼠的舔舐下可扭动身体、挥舞四肢、发出叫声,并可迅速吃乳。假手术组和造模组:新生大鼠甫从子宫中取出时,均全身青紫或苍白,四肢伸展,没有呼吸,心跳过速,对触觉刺激无反应。 (3)第2天翻正反射各组新生大鼠第二天均可完成翻正反射,但造模组翻正的最短时间长于正常组和假手术组(P<0.05),成功的次数也少于正常组和假手术组(P<0.05)。 (4)21d脑组织HE染色结果正常组:神经元的6层结构完整。神经元圆形或锥形,细胞质内见嗜碱性均匀分布的尼氏体,细胞核位于胞体中央,核膜明显。假手术组:神经元的6层结构基本完整,局灶区域可见3层(外锥体细胞层)锥体细胞胞浆红染,胞核浓缩深染,结构消失。模型组:大脑皮质的3层和5层(外锥体细胞层和内锥体细胞层)锥体细胞数量减少,细胞体积缩小,变成三角形,胞浆呈均匀的嗜伊红染色,胞核浓缩深染,结构消失。 实验二: (1)脑组织中NGF的表达: 21d针刺1组分别与正常组和模型组有显著差异(P<0.05),正常组和模型组有显著差异(P<0.05),28d、35d、42d、49d针刺组与正常组和模型组差别无统计学意义(P>0.05)。 针刺1组和针刺2组在分别针刺7d、14d、21d后的NGF数值有显著性差异(P<0.05)。 (2)脑组织中Bax的表达: 42d针刺2组与正常组差别无统计学意义(P>0.05);与模型组有显著性差异(P<0.05),正常组与模型组有显著差异(P<0.05)。 针刺1组和针刺2组在针刺7d后Bax数值有显著性差异(P<0.05)。在针刺14d、21d差别无统计学意义(P<0.05)。 结论: 1.本研究采用延迟剖宫产术,以止血钳钳夹子宫角血管的方法,阻断胎鼠宫内血流,造成胎鼠宫内窒息(窘迫),从而制备HIBD新生大鼠模型,在操作上更为简便,并将缺氧缺血的时间确定为5min。 2.缺氧缺血性脑损伤与参与大鼠大脑皮质中的NGF和Bax表达密切相关,存在不同的表达时间。早期针刺干预对脑瘫幼鼠脑组织中的NGF和Bax表达具有良性调节作用,对NGF的表达起到改善的作用,对Bax的表达确实起到了抑制作用。 3.针刺治疗的介入时间越早,结果越理想。