苹果MdMIF2基因的克隆与功能分析

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苹果(Malus domestica)是蔷薇科苹果属的多年生木本植物,因其品种多、颜色丽、香气浓、味酸甜而受到很多人的青睐。近年来,以苹果为试材的分子生物学研究也越来越广泛,其中苹果叶片离体再生和遗传转化的研究取得了较大进展。MIF2蛋白(mini zinc finger protein)是一种只含有ZF(zinc finger)结构域的小型蛋白质,前人对其在拟南芥和番茄中进行了研究。本研究首次在‘GL-3’苹果中克隆MdMIF2基因全长,分别构建MdMIF2基因的过表达及沉默载体,并利用农杆菌介导法转化苹果‘GL-3’,分别获得了MdMIF2基因过表达与沉默转基因植株,通过测定抗性芽再生率、叶片再生率及平均再生芽数,探究MdMIF2基因的功能,为苹果的高效遗传转化体系研究提供理论基础。本试验主要研究结果如下:1.从‘GL-3’苹果中克隆出MdMIF2基因编码区序列,全长273bp,编码90个氨基酸,含有一个ZF结构域。对MdMIF2基因进行了时空表达模式分析与启动子在线分析,分析了MdMIF2基因的表达特性。2.构建了苹果MdMIF2基因的过表达载体及沉默载体。利用农杆菌介导的遗传转化体系对‘GL-3’苹果进行转化。获得3个MdMIF2基因过表达株系和3个MdMIF2基因沉默株系。3.通过叶片再生试验,发现与非转基因植株相比,MdMIF2基因的过表达植株叶片再生能力明显增强,而MdMIF2基因的沉默植株叶片再生能力则明显减弱。本研究表明苹果MdMIF2基因高水平表达具有促进叶片再生的功能。
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