目的:　　 大多数情况下重组FGF21蛋白的体外表达是使用大肠杆菌表达体系，蛋白以不溶的包涵体形式表达，复性后才有生物活性，复性的蛋白半衰期短，稳定性差，因此本实验在前期研究的基础上，提出了复性修饰一步法来获得活性较高，稳定性好的PEG-FGF21。又由于近年来随着生活水平的提高，心血管疾病的发病率也随之增加，因其致死致残率很高，因此严重危害着人类健康。ROS是指活性氧，当活性氧持续增加超过了机体细胞的清除能力时，就会产生氧化应激。氧化应激与心血管疾病的发生发展有着密切关系。FGF21是新发现的成纤维生长因子超家族一个新成员，已经发现FGF21是一种重要的代谢调节因子，对糖脂代谢有重要的调节作用。近年来有关FGF21对糖尿病，肥胖，脂肪肝等诸多代谢性疾病的研究取得的进展客观，但是关于FGF21是否具有保护心肌细胞作用的研究还不多见。本实验主要研究FGF21对H2O2诱导的H9C2细胞凋亡是否具有保护作用及其保护作用的具体机制。　　 方法:　　 1、用8M的尿素使FGF21变性，稀释复性，复性同时加PEG修饰剂修饰FGF21。　　 2、用阴离子交换柱对复性修饰后的PEG-FGF21进行纯化。　　 3、通过圆二色谱对复性修饰后的PEG-FGF21进行结构鉴定。　　 4、检测PEG-FGF21促进3T3-L1细胞对糖吸收的作用。　　 5、体外用DMEM/F12完全培养基培养H9C2细胞。　　 6、建立H2O2诱导H9C2细胞凋亡的模型。　　 7、检测FGF21、PEG-FGF21对H2O2诱导H9C2细胞凋亡的影响。　　 8、用hoeschst染色，荧光显微镜观察不同处理组的染色情况。　　 9、流式细胞仪检测FGF21对H2O2诱导的H9C2细胞凋亡的影响。　　 10、westemblot检测不同处理组caspase3的表达变化。　　 11、方法同第6步分别检测AKT、p-akt、gsk、p-gsk、IKB、caspase3的表达变化趋势，actin作内参。　　 12、用aktl/akt2的选择性抑制剂western blot法检测p-akt、p-gsk、caspase3的表达变化趋势。　　 13、用AKT的激动剂，gsk的抑制剂氯化锂，western blot法检测p-akt、p-gsk、caspase3的表达变化趋势。　　 结果:　　 1、在PH值为6时修饰率达53％跟自然条件下的修饰率(56％)相差不大，故选择PH6为复性修饰的PH值。　　 2、根据前期的研究，纯化率较高。　　 3、根据圆二色谱图结果显示复性修饰的PEG-FGF21比传统的修饰的PEG-FGF21与FGF21的结构更吻合。　　 4、3T3-L1活性检测得出一步修饰的FGF21活性较好。　　 5、结果显示400uM的H2O2作用2小时凋亡现象比较理想。　　 6、CCK8法显示FGF21对H2O2损伤下可以减少细胞的死亡数。　　 7、Hoechest染色结果显示FGF21和PEG-FGF21处理组的细胞形态比H2O2处理组的细胞形态好。　　 8、Western blot法证明FGF21、PEG-FGF21对在H2O2损伤下的心肌细胞有保护作用。　　 9、Annexin V/PI染色，流式细胞仪检测结果显示FGF21，PEG-FGF21处理组的凋亡数比单纯H2O2处理组的凋亡数少。　　 10、FGF21、PEG-FGF21处理组的AKT、p-akt、gsk、p-gsk的表达较H2O2处理组的高，而且有一定的趋势性。　　 11、Akt1/Akt2的抑制剂可以显著增加caspase3的表达。　　 12、氯化锂可以降低caspase3的表达。　　 结论:FGF21复性和修饰同步进行是可行的;FGF21对H2O2诱导的心肌细胞凋亡有保护作用，而且会通过AKT/GSK信号通路对心肌细胞进行保护。