【摘 要】
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目的:观察大蒜素对胃腺癌SGC-7901细胞端粒酶活性及端粒酶逆转录酶活性的影响并与AZT对比,探讨大蒜素抑制胃癌细胞端粒酶活性的机制及其应用于临床胃癌治疗的可行性.方法:1.M
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目的:观察大蒜素对胃腺癌SGC-7901细胞端粒酶活性及端粒酶逆转录酶活性的影响并与AZT对比,探讨大蒜素抑制胃癌细胞端粒酶活性的机制及其应用于临床胃癌治疗的可行性.方法:1.MTT(四氮唑盐)比色法测定大蒜素和AZT对SGC-7901细胞生长的抑制率:①细胞培养并接种于96孔培养板.②24h后,加入大蒜素使其终浓度为0.025mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml;加入AZT使其终浓度为0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml,培养48h.③加入MTT培养4h后,用二甲基亚砜终止反应.④酶标仪550nm波长处测吸光度OD值,按公式算出抑制率.2.光学显微镜下观察大蒜素和AZT对细胞形态的影响.3.TRAP-PCR-ELISA法检测端粒酶活性的变化.①细胞培养并接种于50ml培养瓶中,贴壁24h.②设立对照组和实验组,加入大蒜素使其终浓度为0.025mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml;加入AZT使其终浓度为0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml.③大蒜素组分别作用12h、24h、36h,于不同时间点收集细胞;AZT组分别作用24h、48h、72h,于不同时间点收集细胞.④端粒酶的提取和端粒重复序列扩增.⑤产物杂交检测.⑥酶标仪4900nm波长处测吸光度OD值.4.RT-PCR法检测端粒酶逆转录酶hTERT活性的变化.①收集并记数经各浓度大蒜素处理36h后的SGC-7901细胞和经各浓度AZT处理72h后的细胞,设立阳性和阴性对照.②提取细胞总RNA.③将所提取的细胞总RNA加入反转录反应体系.④将反转录反应管放入PCR仪进行PCR循环.⑤琼脂糖凝胶电泳,紫外监测仪下观察结果并拍照记录.结论:1.大蒜素能够抑制胃癌SGC-7901细胞的端粒酶活性.2.大蒜素与AZT一样能够抑制hTERT的活性表达,这是其抑制端粒酶活性的重要机制,据此可考虑将其应用于临床胃癌治疗.
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