褐根病是一种由有害木层孔菌(Phellinus noxius)引起的土传真菌病害,到目前为止,还没有一种理想的防治药剂和防治方法来控制它。目前,由于绿色农业倡导从生态学的角度出发,利用低毒高效安全的农药制剂进行病虫害的防治,因此,生物防治因其具有环境友好型及可持续性而具有巨大的潜力。为此,本研究采用平板对峙法,从根际土壤中筛选得到一株高效拮抗树木褐根病菌的细菌菌株HK25,并对其进行鉴定、发酵培养基成分和条件的优化和靶标脂肽基因的检测,同时利用HPLC和ESI-MS/CID对抑菌活性物质进行分离和鉴定,主要研究结果如下:1.从广东、广西、福建、河南、甘肃、西藏和香港地区采集40份树木根际土壤样品,分离出195株细菌。采用平板对峙法获得6株对有害木层孔菌具有拮抗作用的细菌,通过复筛得到一株拮抗效果强且稳定的菌株HK25。利用形态特征、生理生化鉴定和gyr B基因序列比对分析,该菌株鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。2.为提高贝莱斯芽孢杆菌对树木褐根病菌的拮抗效果,对贝莱斯芽孢杆菌HK25的培养基成分和发酵条件进行优化。选取碳源、氮源、无机盐、pH和发酵培养时间五个因素设计单因素试验,试验结果表明:贝莱斯芽孢杆菌拮抗效果最佳培养基组成为:蔗糖10 g、蛋白胨5 g、酵母提取粉5 g和氯化钠5 g;最佳发酵培养时间为48 h,最佳pH为6.5-7。3.通过盐酸沉淀和甲醇抽提法从LB发酵液中获得菌株HK25的脂肽粗提物,经血平板和排油圈试验,表明脂肽粗提物具有表面活性剂性质。并通过对靶标脂肽基因fenB、ituD和lpa-14的检测,结合测序结果和BLAST比对分析,结果表明贝莱斯芽孢杆菌HK25基因组中含有fenB、ituD和lpa-14基因,该菌株具有具有合成fengycin家族和iturin脂肽类抗菌物质的能力;为了进一步明确抑菌物质中抗生素的种类,采用盐酸沉淀法制备了菌株HK25抗菌脂肽的粗提物,并经过HPLC分离纯化,在保留时间为1-4 min、5-22min和26-34 min内获得的3个组分进行抑菌活性测试,结果表明组分2含有主要抑菌物质;经ESI-MS/CID鉴定,确定菌株HK25组分2的主要抑菌物质为丰原素B(fengycin B)和杆菌霉素D(bacillomycin D),其对树木褐根病菌具有较强的抑菌活性。