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程序性死亡因子-1（programmed death-1,PD-1）是参与机体免疫负调控的重要分子,其配体为PD-L1和PD-L2。PD-1和PD-L1表达量升高引起机体免疫抑制或免疫功能损伤是多种病毒感染的重要致病机制。本实验室前期研究表明,猪感染猪圆环病毒2型和猪瘟病毒后,诱导PD-1和PD-L1过表达,激活PD-1/PD-L1通路,造成机体免疫功能损伤。抗体阻断PD-1/PD-L通路可以恢复或逆转机体免疫力,因此,制备抗猪PD-1和PD-L1单克隆抗体,为阻断猪PD-1/PD-L通路提供有效方法途径。本研究的免疫原是表达纯化的猪PD-1和PD-L1胞外区重组蛋白,BALB/c小鼠作为免疫动物,用细胞融合技术融合免疫BALB/c鼠脾细胞和鼠骨髓瘤细胞NS0,用ELISA法多次筛选和克隆化,旨在筛选抗猪PD-1和PD-L1蛋白的单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。研究结果显示,2株单抗SWPD1-2B5和SWPDL1-3B5能分别特异性识别猪重组PD-1和PD-L1蛋白,抗体Ig亚型均为IgG1,PD-1杂交瘤细胞上清和腹水效价分别为1:1×212和1:2.048×105,PD-L1杂交瘤细胞上清和腹水效价分别为1:1×210和1:1.024×105。获得的单克隆抗体SWPD1-2B5和SWPDL1-3B5能分别与相应的重组猪PD-1和PD-L1蛋白反应,且都不与鸡PD-1、Rosetta上清和pET-32a空载体蛋白反应,具有良好的特异性。连续3个月冻存、复苏3次,2B5和3B5杂交瘤细胞株均能稳定分泌抗体SWPD1-2B5和SWPDL1-3B5,培养细胞上清抗体效价分别为1:212和1:210。流式细胞术结果表明2株单抗能分别与猪PBMC有效结合。成功制备抗猪PD-1和PD-L1单克隆抗体,为在蛋白水平研究PD-1、PD-L1表达水平与疾病的关系以及应用抗体阻断PD-1/PD-L1通路在猪持续性病毒感染中的作用奠定了基础。