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犬细小病毒病(Canine parvovirus disease)是由犬细小病毒(Canine parvovirus，CPV)引起犬的一种急性传染病。为了解华南部分地区CPV的流行和抗原变异情况，本研究从华南部分地区3个城市(广州、佛山和深圳)共7家动物医院收集了25份疑似犬细小病毒病临床病料(病犬呕吐物及血便)，其中病犬年龄为3～12个月，均出现典型犬细小病毒病临床症状，病料经F81细胞分离、PCR及测序鉴定，成功分离到25株CPV。对分离毒株的VP2基因进行序列测定，将测定的VP2基因序列与Genbank中注册的CPV VP2基因序列进行遗传进化关系分析，结果表明，华南部分地区分离的25株CPV均为new CPV-2a型，为CPV引起的疾病的预防和研制CPV新型疫苗提供一定的参考依据。 犬瘟热(Canine Distemper，CD)是由犬瘟热病毒(Canine Distemper virus，CDV)引起犬科动物的一种急性、热性、高度按触性传染病，对养犬业造成较大的损失。本研究从华南部分地区3个城市(广州、佛山和深圳)，共7家动物医院收集了89份疑似CD临床病料(病犬口鼻分泌物及粪便等)，其中病犬年龄为2～12个月，均出现典型CD症状，通过RT-PCR方法对病料进行检测，其中10份病料CDV核酸阳性。通过细胞分离从10份病料中分离到4株CDV，对分离株的部分N基因进行序列测定，为CDV引起的疾病的防控提供一定的理论依据。 目前针对CD的治疗方法主要是通过肌肉注射CD高免血清或CD单克隆抗体、并配以辅助性治疗等。但这些方法治愈率低，治疗周期较长，不能很好的控制CDV的感染。RNA干扰(RNA interference，RNAi)是由功能性双链RNA(double-strandedRNA，dsRNA)引发的序列特异性转录后同源靶基因沉默现象，是近几年发展起来的一种用于抑制病毒复制的新技术。此外，腺病毒载体因具有感染细胞种类多、感染效率高、外源基因表达水平高且既适于体外又适于体内研究等特点而被广泛用作基因转移的载体。本研究设计了含有CDV的N-F基因及P-H基因的特异性siRNA(smallinterfering RNA)，并将该siRNA及U6启动子融合片段克隆到pUC57载体中，构建了含CDV N-F、P-H双基因串联的siRNA表达盒重组质粒pUC-(N-F)、pUC-(P-H)。用限制性内切酶PI-SeeⅠ/I-CeuⅠ消化重组质粒和腺病毒载体pAdeno-X，经体外连接法成功构建了重组腺病毒质粒pAd(N-F)、pAd(P-H)。经PCR、酶切及序列测定等鉴定，该重组腺病毒质粒含有2个串联的CDV特异性siRNA片段，且每个独立片段前均带有U6启动子。用PacⅠ酶将重组腺病毒质粒pAd-(N-F)、pAd-(P-H)线性化，用脂质体共转染法将线性的重组腺病毒质粒DNA转染HEK293细胞，经过细胞包装、传代及筛选获得了携带有CDVN-F、P-H双基因串联的siRNA重组腺病毒Ad(N-F)、Ad(P-H)，对获得的重组腺病毒进行PCR鉴定及序列测定正确后增殖、纯化。利用终点稀释法测定重组腺病毒滴度为Ad(N-F)为109.67 pfu/mL、Ad(P-H)为109.5 pfu/mL。这为进一步开展CDV的抗感染研究奠定了基础，为CD的防控提供新的解决思路。