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一、目的从给药剂量、给药时间、采血时间、抗凝剂选择、供体选择、保存条件等方面比较中药DCP与DCS有效成分差异,为建立并完善中药血浆药理学方法提供研究依据。二、方法1.采用HPLC、HPLC-MS等方法测定不同给药剂量、给药时间及采血时间黄芩、补阳还五汤大鼠DCP和DCS中有效成分的含量；测定苦参、调胃承气汤大鼠不同抗凝剂DCP和DCS有效成分含量和离子强度；测定大鼠桂枝不同保存条件DCP和DCS中有效成分含量；测定大鼠、兔、猴三种不同供体来源的人参、四君子汤DCP中有效成分含量。2.采用2-DE-MS技术进行麻黄汤含药血浆和血清蛋白质(肽)组学比较。3.采用渗透压摩尔浓度法和电位法测定延胡索、水蛭、朱砂、四物汤DCP和DCS加入到DMEM培养液后渗透压和PH值的变化。三、结果1.给药剂量、时间和采血时间的影响黄芩DCP与DCS比较：高剂量组DCP黄芩苷峰浓度时间点及浓度为：第3天药后1h,浓度为(5.48±2.51)ug/ml；高剂量组DCS黄芩苷峰浓度时间点及浓度为：第5天药后1h,浓度为(5.47±2.17)ug/ml。低剂量DCP黄芩苷峰浓度时间点及浓度为：第5天药后1h,浓度为(5.27±2.13)ug/ml;低剂量DCS黄芩苷峰浓度时间点及浓度为：第5天药后1 h,浓度为(5.21±2.18)ug/ml。补阳还五汤DCP与DCS比较：高剂量组DCP阿魏酸峰浓度时间点及浓度为：第3天药后1h,浓度为(0.386±0.121)ug/ml;高剂量组DCS阿魏酸峰浓度时间点及浓度为：第3天药后1 h,浓度为(0.384±0.116)ug/ml。低剂量DCP阿魏酸峰浓度时间点及浓度为：第3天药后1 h,浓度为(0.383±0.127)ug/ml；低剂量DCS阿魏酸峰浓度时间点及浓度为：第3天药后1 h,浓度为(0.380±0.115)ug/ml。2.抗凝剂选择的影响苦参不同抗凝剂血样苦参碱含量从高至低为：DCP(肝素)>DCP(EDTA)>DCS(不抗凝)>DCP(枸橼酸),调胃承气汤不同抗凝剂血样大黄酸含量从高至低为：DCP(肝素)>DCS(不抗凝)>DCP(EDTA)>DCP(枸橼酸)。组间统计比较,苦参碱、大黄酸含量差异无统计学意义(P<0.05)。与空白组比较,苦参组DCS和DCP离子强度均显著性降低(P<0.01)；调胃承气汤组肝素、EDTA抗凝血浆离子强度均显著性降低(P<0.01)。组内与血清比较,血浆离子强度均升高,其中枸橼酸抗凝血浆离子强度显著升高(P<0.01)。3.保存条件与时间的影响与A组(不保存)比较,保存30d后,-20℃保存条件下的DCS和DCP中桂皮酸减少率为(12.9%,13.2%),-80℃保存条件下的DCS和DCP桂皮酸浓度减少率为(11.4%,11.9%),差异均无统计学意义(P>0.05)；保存60d后,-20℃保存条件下的DCS和DCP中桂皮酸减少率为(18.0%,17.8%),-80℃保存条件下的DCS和DCP中桂皮酸减少率为(14.8%,13.3%),桂皮酸含量有所降低,但差异均无统计学意义(P>0.05)；保存180d后,-20℃保存条件下的DCS和DCP中桂皮酸减少率为(39.9%,38.3%),-80℃保存条件下的DCS和DCP中桂皮酸减少率为(33.2%,32.6%),其中-20℃C保存条件下的DCS和DCP中桂皮酸含量降低差异具有统计学意义(P<0.05);-80℃保存的DCS和DCP中桂皮酸含量降低不明显,无统计学意义(P>0.05)。4,血浆供体选择的影响 人参主要有效成分在不同动物供体DCP含量的高低依次为：猴>兔>大鼠。四君子汤主要有效成分在不同动物供体DCP含量的高低依次为：猴>兔>大鼠。三种不同供体中药有效成分含量存在一定差异,但无显著性(P>0.05)。5.血浆与血清蛋白组学比较与BP比较,DCP共识别到32个差异蛋白点,其中26个差异点表达上调,6个差异点表达下调；与BS比较,麻黄汤DCS共识别到18个差异蛋白点,其中14个差异点表达上调,4个差异点表达下调；与DCS比较,麻黄汤DCP共识别到26个差异蛋白点,其中18个差异点表达上调,8个差异点表达下调；去除纤维蛋白原血浆前后比较,麻黄汤DCP共识别到24个差异蛋白点,其中20个差异点表达上调,4个差异点表达下调。成功鉴定出血浆与血清中7个高表达差异蛋白,分别为a-1-AT、ApoE、ApoA-l、γ-FIB、HP、FPA和molybdate ABC transporter。6.血浆对体外实验体系的影响随着培养时间的延长,各组别的培养液的渗透压和PH值逐渐增加,但与同时期的对照组比较,加入含药血清与含药血浆培养液的渗透压和PH值,两者之间差异不具有显著性(P>0.05)。同时期相同药物和剂量的含药血浆与含药血清培养液的渗透压和PH值,两者之间差异不具有显著性(P>0.05)。四、结论1.麻黄汤含药血浆蛋白组学结果比含药血清更接近血液真实值,提示以含药血浆进行中药半体内实验。2.黄芩和补阳还五汤有效成分黄芩苷和阿魏酸在大鼠血浆和血清中存在差异,制备中药含药血浆采用2倍量以上临床等效剂量,连续灌胃给药3天以上,最后一次给药后lh取血为宜。3.应用不同抗凝剂制备的苦参、调胃承气汤含药血浆和含药血清中有效成分存在差异,但离子强度基本一致,制备中药含药血浆推荐使用肝素抗凝,尽量避免使用枸橼酸抗凝。如肝素对实验结果有干扰再考虑其它抗凝剂。4.桂枝含药血浆和含药血清中桂皮酸浓度与保存时间和保存温度有关,含药血浆的保存条件推荐-20℃冰冻保存不超过60天或-80℃超低温保存不超过180天。5.从大鼠、兔、猴三种动物中制备的含人参和四君子汤的血浆和血清有效成分含量无差异,供体的选择无特殊要求,建议遵循来源相同原则。基于大鼠质量可靠,使用广泛,操作便利,可以考虑血浆供体首选大鼠。6.延胡索、水蛭、朱砂、四物汤含药血浆、含药血清对DMEM培养液的渗透压和PH值的影响差异无显著性。