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临床中存在许多妊娠子宫平滑肌收缩机能紊乱的状态,如早产、产程延长、产后出血、过期妊娠等,这些都对母儿产生极大的危害,若能阐明妊娠子宫平滑肌收缩的调控机制,对于理解妊娠的维持、分娩的启动及早产的发生等生理及病理事件有着重要的意义。h1calponin作为平滑肌收缩特有的调控蛋白己得到广泛证实,具体的调控机制仍存在争议,目前研究数据大多来源于大血管平滑肌。子宫平滑肌与大血管平滑肌是不同种类的平滑肌,h1calponin对于子宫平滑肌的收缩调控机制少有研究。我们前期己发现h1calponin可能参与了分娩时的子宫收缩调控,但具体机制仍不明确,本博士课题拟在前期研究的基础上,探讨h1calponin调控妊娠子宫平滑肌收缩的分子机制。第一章临产前后人类子宫平滑肌中h1calponin的细胞内定位及磷酸化表达水平变化目的：探讨h1calponin在临产前后磷酸化表达水平的变化及细胞内位置的改变。方法：取未孕组、足月未临产组、足月临产组妇女子宫平滑肌组织,每组各10例。使用Western Blot检测各组子宫平滑肌组织中h1calponin及p-hl calponin(磷酸化h1calponin)蛋白表达水平；采用免疫荧光技术观察各组子宫平滑肌细胞内h1calponin的定位情况。结果：Western Blot结果显示：与未孕组相比较,h1calponin总蛋白表达水平在足月未临产组及足月临产组均显著增高(P<0.05)；p-hl calponin蛋白表达水平在足月未临产组及足月临产组也较未孕组显著增高(P<0.05); p-h1calponin/h1calponin(磷酸化h1calponin与h1calponin总蛋白比值)为足月未临产组与未孕组相比较,差异无显著性(P>0.05),足月临产组显著高于未孕组(P<0.01)。免疫荧光结果提示：在未孕组及足月未临产组人类子宫平滑肌细胞中,h1calponin蛋白主要位于细胞浆中；而在足月临产组的人类子宫平滑肌细胞中,h1calponin蛋白主要位于细胞质的周边区域,几乎接近细胞膜。结论：妊娠期h1calponin总蛋白的表达增加及h1calponin的未激活状态与维持妊娠相关；h1calponin的显著磷酸化及细胞内移位与分娩时的子宫平滑肌收缩相关。第二章PKC-ε、h1calponin在不同孕期小鼠子宫平滑肌中的表达及与足月产、早产的关系目的：探讨PKC-ε (protein kinase C epsilon,蛋白激酶C epsilon)及h1calponin在妊娠小鼠子宫平滑肌细胞中总蛋白和磷酸化蛋白的时空表达变化及与足月临产、早产的关系和机制。方法：参照文献建立小鼠酒精灌胃早产模型。分为孕7天组、孕12天组、孕17天组、孕18天组、孕19天组、足月临产组及早产组,各组小鼠均为10只。应用Western blot检测子宫平滑肌中PKC-ε、 p-PKC-ε(磷酸化PKC-ε)、h1calponin、p-h1calponin(磷酸化h1calponin)的蛋白表达。结果：h1calponin总蛋白的表达量从孕12天起出现显著增高(P<0.05),一直持续到分娩启动后；p-h1calponin蛋白的表达水平从孕17天起出现显著增高(P<0.05),一直持续到分娩启动后；p-h1calponin/h1calponin比值在临产后显著增高(P<0.05)。PKC-ε总蛋白的表达量从孕7天起出现显著增高(P<0.05),一直持续到分娩启动后；p-PKC-ε蛋白的表达水平从孕18天起出现显著增高(P<0.05),一直持续到分娩启动后；p-PKC-ε/PKC-ε比值在临产后显著增高(P<0.05)。早产小鼠子宫平滑肌组织中,h1calponin总蛋白、p-h1calponin及p-h1calponin/h1calponin比值均与足月临产组无显著性差异(P>0.05)；早产小鼠子宫平滑肌组织中,PKC-ε总蛋白、p-PKC-ε蛋白及p-PKC-ε/PKC-ε比值均与足月临产组无显著性差异(P>0.05)；结论：PKC-s及h1calponin均在临产后大量激活。PKC-s可能通过激活h1calponin促进早产及足月分娩时的子宫收缩。第三章PKC-ε/h1calponin信号通路调控小鼠子宫平滑肌收缩的机制目的：探讨PKC-ε/h1calponin信号路径对妊娠小鼠子宫平滑肌收缩的调节机制及该路径的非钙依赖性。方法：将不同浓度的PKC-ε特异性激动剂(Psi-RACK)作用于孕19天小鼠子宫平滑肌条,观察肌条的收缩幅度和h1calponin磷酸化的表达情况。为验证肌条的收缩及h1calponin磷酸化是否是Psi-RACK特异性引起,将10-9mol/L PKC-ε特异性抑制剂(epsilon-V1-2)加入10-9mol/L的Psi-RACK浴槽中,进行干预实验。为探索PKC-ε/h1calponin路径引起的肌条收缩是否具有非钙依赖性的特点,选用肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase, MLCK)特异性抑制剂ML-930umol/L加入浓度为10-9mol/L的Psi-RACK浴槽中,进行干预实验。结果：将不同浓度的PKC-ε特异性激动剂(Psi-RACK)作用于子宫平滑肌条后,子宫平滑肌条的收缩幅度和h1Calponin磷酸程度均在Psi-RACK浓度为10-9mol/L均显著升高(P<0.05)。PKC-ε特异性抑制剂可以抑制Psi-RACK引起的肌条收缩,但ML-9对Psi-RACK引起的肌条收缩无明显抑制作用。结论：PKC-ε/h1calponin信号路径可促进妊娠小鼠子宫平滑肌收缩,该路径可能具有非钙依赖性的特点。