辣椒根际微生物中拮抗放线菌的分离及拮抗活性研究

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本文用高氏一号培养基从辣椒根际土壤中分离纯化出87株微生物菌株,采用涂布法、平板对峙法、抑制菌丝生长速率法、溶藻平板法对分离菌株的生物活性进行筛选研究。主要研究结果如下:1、用稀释平板涂布法对采自贵州花溪辣椒种植地根际土壤中进行分离纯化,共纯化出87株微生物菌株,并对所分离菌株进行了抗细菌活性、抗真菌活性的生物测定。以白菜软腐病菌(Erwinia carotorora)、柑橘溃疡病菌(Xanthomonas axonopodis pv.citri)、烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)3种细菌病原菌为指示菌,通过涂布法对分离的菌株进行抗细菌活性测定,结果表明,共有40株菌株对一种以上细菌病原菌表现出不同程度的抑菌活性;以水稻纹枯病原菌(Thanatephorus cucumeris,TC)、苹果炭疽病原菌(Glomerella cingulata,GC)、油菜菌核病原菌(Sclerotinia sclerotiorum,SS)、苹果腐烂病原菌(Cytospora mandshurica,CM)、茄子黄萎病原菌(Verticillium dahliae,VD)、马铃薯晚疫病原菌(Phytophthora infestans,PI)6种真菌病原菌为指示菌,用平板对峙法对分离菌株进行抗真菌活性测定,结果表明,共有30株微生物菌株对一种以上真菌病原菌表现出抑菌活性。以水稻纹枯病原菌(TC)、苹果炭疽病原菌(GC)、油菜菌核病原菌(SS)、苹果腐烂病原菌(CM)、茄子黄萎病原菌(VD)、马铃薯晚疫病原菌(PI)6种真菌病原菌为指示菌,通过抑制菌丝生长速率法对分离菌株发酵液的抑菌活性进行复筛,结果表明,菌株WKFF21、WKFF31、WKFF33、WKFF34、WKFF40、WKFF54、WKFF67、WKFF86对茄子黄萎病原菌的抑制率达60%以上,WKFS4对油菜菌核病原菌的抑菌活性达74.14%;通过溶藻平板法对菌株的溶藻活性进行研究,研究结果表明,有3株微生物菌株对铜绿微囊藻具有溶藻活性,分别WKFF31、WKFF34、WKFF37。2、对部分拮抗活性较好的分离菌株进行分子生物学鉴定,结果表明,菌株分别属于3门5纲7目8科9属。3、通过形态特征、培养特征、生理生化特征以及分子生物学等多相分类方法,对放线菌候选菌株WKFF34和WKFS4进行多相鉴定。结果表明,WKFF34和WKFS4均属于放线菌门、放线菌纲、放线菌目、链霉菌亚目、链霉菌科、链霉菌属。其中WKFF34鉴定为蓝微褐链霉菌(Streptomyces cyaneofuscatus),WKFS4鉴定为浅紫链霉菌(Streptomyces violascens)。4、对放线菌菌株WKFF34和WKFS4发酵液的抗菌谱和发酵液稳定性进行了研究。研究结果表明,2个菌株均具有抗菌谱广的特点,对水稻纹枯病菌、苹果炭疽病原菌、油菜菌核病原菌、苹果腐烂病原菌、茄子黄萎病原菌、小麦赤霉病原菌、马铃薯晚疫病原菌、辣椒疫霉病原菌、番茄灰霉病原菌表现出不同的抑菌活性,其中菌株WKFF34发酵液对水稻纹枯病菌、苹果炭疽病菌、油菜菌核病原菌的抑制率分别为70%、79.48%、80.43%,菌株WKFS4发酵液对水稻纹枯病菌、苹果炭疽病菌、油菜菌核病、茄子黄萎病原菌的抑制率分别为75.71%、74.39%、83.8%、78.17%;发酵液稳定性研究结果发现,菌株WKFF34发酵液和菌株WKFS4发酵液均对温度和紫外不稳定,对pH值比较稳定。5、对WKFF34菌株的溶藻活性和溶藻作用方式进行了研究。研究结果表明,菌株WKFF34能够抑制铜绿微囊藻的正常生长,具有溶藻活性。溶藻作用是通过释放胞外溶藻活性物质产生的间接溶藻作用,该胞外溶藻活性物质在121℃下灭菌30min仍能保持较强的溶藻活性,具有热稳定性。
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