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目的： 构建原核表达载体pET-28a-PRMT2、pGEX-6p-1-ER-α36、pGEX-6p-1-ER-α66，研究PRMT2与ER-α36、ER-α66体外相互作用，为揭示PRMT2对乳腺癌细胞增殖与耐药的影响提供依据及方向。 方法： 1.原核表达载体构建及鉴定：从基因文库选取目的基因，设计相应基因引物，PCR扩增目的基因，将目的基因及相应载体进行双酶切、连接、转化、重组质粒扩增及提取，构建的质粒进行双酶切实验检测及基因测序鉴定； 2.原核载体表达及蛋白重组纯化：将构建的原核表达载体pET-28a-PRMT2、pGEX-6p-1-ER-α36、pGEX-6p-1-ER-α66转化到Bl21-de3表达型大肠杆菌，进行小剂量诱导表达检测，重组质粒扩大培养及蛋白纯化技术，Western blot检测蛋白的表达； 3.GST-pull down实验：分析PRMT2、ER-α36、ER-α66体外相互作用，重组纯化得到蛋白GST-ER-α36、GST-ER-α66、GST、His-Tag-PRMT2以及Glutathione琼脂糖珠在体外混合充分孵育，进行重复洗涤,用Western blot实验分析PRMT2、ER-α36、ER-α66及GST表达情况。 结果： 1.原核表达载体构建及鉴定：成功构建pET-28a-PRMT2、pGEX-6p-1-ER-α36、pGEX-6p-1-ER-α66原核表达载体，进行酶切实验鉴定后，得到的基因片段与预期一致,并且进行基因测序鉴定，显示构建序列与目的基因碱基序列完全一致，表明原核表达载体构建成功。 2.原核载体表达及蛋白重组纯化：原核表达载体pET-28a-PRMT2、pGEX-6p-1-ER-α36、pGEX-6p-1-ER-α66成功转化到Bl21-de3表达型大肠杆菌，纯化得到目的蛋白His-Tag-PRMT2、GST-ER-α36、GST-ER-α66及GST，与预测蛋白分子量一致，未见明显杂带。 3.GST-pull down实验：GST融合蛋白ER-α36、ER-α66以及GST固定在Glutathione琼脂糖珠分别与PRMT2相互作用，Western blot检测发现了PRMT2与ER-α36、ER-α66体外存在相互作用，见到PRMT2与ER-α36、ER-α66都有表达，但GST蛋白与PRMT2并没有相互作用。 结论： 成功构建pET-28a-PRMT2、pGEX-6p-1-ER-α36、pGEX-6p-1-ER-α66原核表达载体，并证实了PRMT2与ER-α36、ER-α66体外存在相互作用。