光合类囊体膜主要由光系统Ⅱ、细胞色素b₆f复合物、光系统Ⅰ以及ATP合酶四个超分子复合物组成。为进行光合作用功能基因组学研究,采用分裂泛素化酵母双杂交技术从拟南芥叶片cDNA文库中筛选互作蛋白,以期发现参与光系统Ⅱ组装和功能调控的蛋白因子。本论文为实现这一设想作了一些尝试: 1.利用分裂泛素化酵母双杂交系统研究光合类囊体膜蛋白间的相互作用。将叶绿体psbA基因编码的D1蛋白作为诱饵蛋白,以叶绿体基因psbD编码的D2蛋白、petB编码的Cytb₆蛋白作为靶蛋白,分别共转化酵母菌株后进行相互作用分析。实验结果表明,诱饵蛋白D1能与来源于同一复合物光系统Ⅱ的D2蛋白发生相互作用,而与来源于细胞色素b₆f复合物的Cytb₆蛋白没有互作。这一结果表明,分裂泛素化酵母双杂交系统可以用于检测光合膜蛋白间的相互作用,从而为研究光合膜蛋白生物发生的调控机理提供一个有效的工具。 2.采用Gateway克隆技术构建拟南芥叶片cDNA入门文库（entry library）以attB2-Oligod（T）反转录合成cDNA第一链,在DNA聚合酶Ⅰ作用下合成第二链后,在其5’端引入attB1位点以进行BP重组反应。以反应产物电转化大肠杆菌DH10B。对文库进行质量分析显示该文库代表性为0.97×10⁷,平均插入片段长度684bp,插入片段长度范围500-950bp。