该研究建立了人鼻粘膜上皮(HNE)细胞培养模型,对纤毛细胞分化作定量研究,并探讨纤毛细胞分化的调节因素.HNE细胞培养在覆盖胶原蛋白凝胶(CG)的支持膜上,行气液界面(ALI)培养,采用激素,生长因子添加培养液.通过扫描电镜和图像分析计算纤毛细胞覆盖面积的百分比.结果显示,液面下培养时纤毛细胞分化很差,培养二周后纤毛细胞覆盖面积只有0.3%,而行ALI培养可以促进纤毛细胞分化.从培养液中撤掉氢化可的松并行ALI培养二周,与对照组相比纤毛面积减少50%.从培养液中撤掉维生素A酸也造成纤毛细胞覆盖面积的减少.说明类固醇激素和维生素A酸也造成纤毛细胞分化有促进作用.而当从培养液中撤掉表皮生长因子和霍乱毒素后,纤毛细胞明显增加,说明高水平的促细胞生长物质抑制纤毛细胞分化.粘液分泌在呼吸道防御机制上起重要作用.呼吸道的分泌细胞包括上皮表面的杯状细胞和粘膜下腺体,而呼吸道粘液主要来源于粘膜下的浆液腺和粘液腺,对腺体分泌的生理及生物化学研究,细胞培养是一个基本手段.但有关呼吸道腺体细胞培养报道很少,至今为止,研究只限于动物和人的气管腺的分离和培养.为了研究人鼻粘膜腺体(HNG)细胞的分泌,研究小组进行了HNG细胞的CG上悬浮培养,结果证明HNG细胞呈现上皮系细胞特征,经过二周的培养,出现分泌粘液糖蛋白的表型分化,经AB-PAS染色染成兰色.透射电镜下可见是显的分泌颗粒,细胞膜表面生长微绒毛,具有典型的腺上皮特征.尽管CG上悬浮培养可以促进细胞分化,但无法构建组织结构,CG内三维培养为这一研究开辟了新的道路.关于HNG细胞的三维培养国内外均未见报道,研究小组首次成功地建立了HNG细胞的三维培养模型.实验证实,HNG细胞在CG内呈三维生长,一周后形成典型的管腔样结构.透射电镜下,管腔侧表面布满微绒毛,细胞膜之间形成典型的紧密联接,与正常体内的腺体结构相似,而且呈现分泌特征,AB-PAS染色呈阳性反应,说明有粘液糖蛋白的分泌.鼻粘膜腺体是包括浆液腺和粘液腺的混合腺,为了证明是否存在浆液腺细胞的分化,采用了作为粘液腺细胞标志之一的抗溶菌酶抗体,进行免疫组织化学染色,结果90%以上的细胞呈阳性反应,证明HNG细胞的三维培养改变了原来的分化表型,同一细胞具有了浆液腺和粘液腺的二种分化表型,其分化机理有待进一步研究.