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花器官的诱导形成和分化是高等植物的发育过程中特别重要的过程。近年来，随着对双子叶植物花发育机制研究的深入，尤其是对模式植物拟南芥和金鱼草的研究，已经从最初的“ABC模型”逐步发展到了相对完善的“A-E模型”。双子叶植物花的诱导、形成以及花器官分化的分子遗传学机制已创立。但是，对单子叶植物花发育过程的分子机制研究还不深入。因此对单子叶植物水稻的花器官发育的研究、对植物发育生物学与分子生物学的发展有着重要的意义。本研究的材料水稻突变体psd1(pastel-stamen degeneration)植株，是从台湾粳／圭630杂交株F1代花药培养后代的DH群体中发现的。psd1植株在抽穗前与野生型没有明显区别，与正常植株同步进入生殖发育，但其颖花外形明显膨大，雌雄蕊完全退化，内外稃大量增生，形成多重颖壳结构。由此推测，PSD1基因为控制花器官发育的关键基因之一，可能在花器官原基分化的早期表达。本课题组已经对该基因进行了精细定位，并确定了候选基因。本研究拟用RNAi技术来研究该基因的功能，共获得两个方面的结果。一：构建了双元表达载体pTCK303-ARⅠ-SRⅠ和pTCK303-ARⅡ-SRⅡ。首先提取了正常PSD1植株在花发育不同时期的总RNA,利用设计的两对引物P1和P2，以提取的总RNA为模板进行RT-PCR后获得cDNA序列。针对该cDNA的特异序列设计出两对引物P3与P4和P5与P6，并用该cDNA为模板进行PCR扩增获得片段RI1和RI2。将这两个片断连接到pMD18-T vector上，转化大肠杆菌感受态细胞，挑取阳性克隆提取质粒，PCR检测后送TaKaRa和上海生物工程公司测序。测序结果显示这两个片断大小分别为267bp和337bp；与cDNA中相应的片断比较序列完全相符。分别将这两个片段SpeⅠ／SacⅠ双酶切后与同样经过这两种酶双酶切的pTCK303载体进行连接并转化大肠杆菌感受态细胞上，筛选后挑取阳性克隆并提取质粒进行SpeⅠ／SacⅠ双酶切，电泳后都出现两条带，其一是14.6kb的载体片断，另一条是267bp或337bp的目的片断。将这两个载体分别命名为pTCK303-ARⅠ和pTCK303-ARⅡ。对上述两个载体进行BamHⅠ／KpnⅠ双酶切后与经过同样酶进行双酶切的pTCK303连接，并将连接产物转化到大肠杆菌感受态细胞中，筛选阳性克隆提取质粒，BamHⅠ／SacⅠ双酶切后电泳结果都显示两条带，一条是14.1左右的载体片断(不含内含子部分)，另一条是长约1kb(包括正反向目的片断和内含子)的片断，表明目的片断已经以正向和反向连接到载体中。将该载体分别命名为pTCK303-ARI-SR1和pTCK303-ARⅡ-SRⅡ，提取这两个载体的质粒用冰冻法转化农杆菌感受态细胞，筛选阳性克隆提取质粒，用引物P3与P4或者P5与P6进行PCR检测，能得到目的片断RI1或RI2。这表明载体pTCK303-ARⅠ-SRⅠ和pTCK303-ARⅡ-SRⅡ已经成功转化到农杆菌细胞中去。二：用携带载体pTCK303-ARⅠ-SR1和pTCK303-ARⅡ-SRⅡ的农杆菌浸染转化水稻植株日本晴和PSD1成熟胚诱导的愈伤组织，并对其进行低浓度潮霉素(30mg／L)筛选后再高浓度(50mg／L)筛选，共培养种子500粒左右，获得了抗性愈伤78粒，有待进一步生根、移栽、检测和表型观察。