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目的：高糖下调缺氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)的表达,进而抑制缺氧状态下血管新生。Axl能调控内皮细胞功能,促进内皮成管,然而Axl是否参与高糖缺氧条件下内皮成管及HIF-1α的调控尚不清楚。本实验拟观察高糖对缺氧条件下内皮细胞成管作用及Axl表达的影响,检测过表达Axl对高糖缺氧条件下内皮细胞成管作用的影响及HIF-1α表达的调控作用。方法：1.给予人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)和人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)不同浓度葡萄糖(5.5mmol/l、11mmol/l、25 mmol/l和30mmol/l)处理,分别培养24 h、48 h和72 h, MTT检测高糖对细胞活性的影响；2.在高糖条件下给予HUVECs和Eahy926细胞不同时间缺氧处理,MTT检测缺氧时间对细胞活性的影响：3.摸索出合适的高糖缺氧条件后,实验分为高糖缺氧组和对照组(单纯缺氧组),用划痕实验和体外基质胶成管实验检测高糖对缺氧状态下HUVECs和Eahy926细胞迁移和管腔形成能力的影响；4.Western blot方法检测高糖对缺氧状态下HUVECs和Eahy926细胞Axl、HIF-1α蛋白表达的影响；5.构建Axl过表达慢病毒并转染Eahy926细胞,用Western blot检测细胞中Axl的表达情况：6.病毒转染成功后,将实验分为四组：对照组(阴性病毒)、Axl过表达组、R428组(Axl抑制剂R428+阴性病毒)、Axl过表达+R428组。划痕实验和体外基质胶成管实验检测过表达Axl对高糖缺氧条件下内皮细胞迁移和成管作用的影响；7.实时荧光定量PCR和Western blot检测过表达Axl对HIF-1α mRNA及蛋白含量的影响；8.使用蛋白合成抑制剂放线菌酮(Cycloheximide, CHX)、PI3K抑制剂LY294002,MEK抑制剂PD98059和mTOR抑制剂Rapamycin,应用Western blot检测过表达Axl调控HIF-1α表达的分子机制。结果：1.葡萄糖对内皮细胞活性的抑制呈浓度和时间依赖性,30 mmol/I葡萄糖处理HUVECs或Eahy926细胞48小时,能显著抑制细胞活性：2.缺氧时间对高糖状态下内皮细胞活性呈时间依赖性,高糖状态下,缺氧12h和24 h组与单纯高糖组相比,内皮细胞活性均品著降低；3.在HUVECs和Eahy926细胞中,高糖24 h+缺氧6h迁移距离均少于缺氧6 h组,HUVECs两组迁移距离分别为182.9±14.6和303.1±10.8,Eahy926两组迁移距离分别为190.7±24.8和293.4±23.9,差异均有统计学意义(P<0.05);高糖24 h+缺氧6h组小管数目少于缺氧6h组,两种细胞成管分别减少了30.8%和52.9%,差异均有统计学意义(P<0.05)：4.在HUVECs和Eahy926细胞中,高糖缺氧组的Axl蛋白表达量比单纯缺氧组Axl蛋白表达量少,两种细胞分别减少了48.4%和47.1%,差异均有统计学意义(P<0.05)：在Eahy926细胞中,高糖缺氧组的HIF-1α蛋白表达量比单纯缺氧组减少了40.7%(P<0.05)；5.转染过表达Axl慢病毒后,Eahy926细胞的Ax1蛋白表达明显上调；6.过表达Axl组(231.3±20.6)细胞迁移距离比对照组(179.5±28.9)长(P<0.05);过表达Axl组的小管数目比对照组多66.8%(P<0.05)；7.实时荧光定量PCR结果显示,过表达Ax1并不影响HIF-1α的mRNA表达;Western blot结果显示,与对照组相比,过表达Axl组HIF-1 α蛋白表达增加了90.6%(P<0.05)；8.Axl过表达+CHX组与Axl过表达组相比,HIF-1 α的蛋白表达减少了95%(P<0.05),而CHX组与对照组相比变化不明显,说明蛋白合成途径参与过表达Axl导致的HIF-1α表达增加；过表达Axl能激活Akt、p70S6K磷酸化,对Erk磷酸化无影响,LY294002和Rapamycin能抑制过表达Ax1诱导的HIF-1α表达。结论：1.高糖抑制缺氧条件下脐静脉内皮细胞的成管能力；2.过表达Ax1逆转高糖缺氧条件对脐静脉内皮细胞成管的抑制；3.高糖缺氧条件下,过表达Axl通过调控PI3K/Akt/mTOR/p70S6K通路增加HIF-1α蛋白合成。