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目的建立微量核酸的巢式定量PCR检测技术,并运用该技术检测血浆或培养细胞上清中细胞外循环RNA分子。通过创建细胞饥饿、缺氧、低温、药物干预等模型探讨循环RNA在肿瘤患者异常增高的原因及其对临床胃癌诊断、治疗的意义。方法联合运用Trizol试剂与离心吸附柱方法提取血浆或培养细胞上清中微量循环RNA,建立基于SYBR greenⅠ的巢式定量PCR检测微量RNA的技术。探讨体外胃癌细胞株（SGC7901）经血清饥饿、缺氧、低温培养后,上清细胞外RNA的变化规律,以此初步分析肿瘤患者循环RNA异常增高的原因。细胞经5-氟尿嘧啶、顺铂作用后,定时观察培养上清RNA的变化,以此推断循环RNA对肿瘤患者化疗的监测价值。同时分别对胞内与胞外β-actin基因相对表达水平进行比较。通过过滤实验及RNase抵抗实验判断循环RNA对RNase的抵抗力,初步分析其可能的一些生物学性质。体内联合检测手术前和手术后的胃癌患者及健康人外周血循环CXCR4和Bmi-1基因表达水平以及血浆CEA、CA19-9含量,结合胃癌患者临床资料研究其对胃癌诊断、治疗的意义。结果联合运用Trizol-离心柱技术成功分离出血浆循环RNA分子,巢式定量PCR检测微量RNA线性良好,且敏感性达到100～1copies/μl。SGC细胞经血清饥饿、低温处理后一定时期内上清RNA较对照组显著降低,而缺氧组细胞上清RNA含量在48小时后较对照组明显升高。肿瘤细胞经抗瘤药作用48小时后,大部分细胞死亡,上清RNA含量略上升但不明显,剩余细胞经反复换液彻底移去残留药物后,上清RNA含量较药物作用前及对照组均显著降低。同等量的胞内与胞外RNA经同步逆转录PCR后,β-actin胞外表达水平显著低于胞内表达水平。培养细胞上清经0.22pm滤膜过滤后滤液RNA含量显著低于过滤前及粘附于滤膜上的RNA含量,滤液、滤膜及滤前上清RNA均能抵抗RNase的降解而提纯游离的SGC胞内RNA经RNase作用后被完全降解。胃癌患者外周血浆循环CXCR4、Bmi-1基因及CEA、CA19-9蛋白表达显著高于健康人。患者经手术后表达下降。血浆CXCR4、Bmi-1表达与患者年龄、分期、分化程度、是否转移等因素有关。基因的联合检测能有效提高诊断的敏感性和准确率,且诊断价值优于CEA、CA19-9的组合。结论巢式荧光定量PCR是一种敏感的检测微量核酸的方法。缺氧与较高的代谢水平是导致肿瘤细胞释放循环RNA增加的重要原因。循环RNA对RNase有一定的抵抗力。外周血循环RNA肿瘤相关基因的检测对肿瘤的诊断及治疗有一定参考价值,且优于传统肿瘤标志物。