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胆管癌是预后很差的消化系统恶性肿瘤,尽管手术切除仍是目前首选的治疗手段,但由于手术切除率低,且术后远期疗效不佳,综合治疗已被广泛认同为目前胆管癌的最佳治疗方案,其中化疗是胆管癌综合治疗的重要组成部分。总体上讲,目前的化疗药物疗效尚不够理想,文献资料报告单用化疗有效率不超过50%,而且存在明显毒副作用。因此,有必要进一步探索新的化疗药物,提高胆管癌化学治疗的疗效。近年来,我国学者应用砷剂(As2O3)作为抗肿瘤药物临床治疗急性早幼粒细胞白血病(APL),有特异的疗效,完全缓解率极高,副作用少;体外实验As2O3对肝癌、食管癌、神经母细胞癌、胃癌、头颈部癌等瘤细胞有促凋亡及抑制生长的作用,某些细胞则不敏感。因此,本实验以人QBC939细胞为研究对象,观察As2O3抗胆管癌的效应及其机制。 实验主要包括:(1)观察As2O3对QBC939细胞增殖动力学的影响——生长曲线图和克隆形成,并以MTT方法比较As2O3与DDP,MMC,VCR,VP-16,5-Fu,ADM等化疗药物的体外药物敏感性。(2)检测凋亡和细胞周期——形态学观察包括活细胞观察、丫啶橙荧光染色、透射电镜;定量采用TUNEL和流式细胞仪。(3)采用Boyden侵袭小室测定As2O3对QBC939细胞侵袭力和运动力的影响。(4)SABC方法检测细胞bcl-2,PCNA以及uPA的表达。(5)TUNEL方法检测As2O3诱导血管内皮细胞ECV304凋亡;MTT方法测定As2O3抑制ECV304增殖和As2O3抑制QBC939条件培养液促进ECV304细胞增殖的作用;观察As2O3对鸡胚CAM血管生成的影响与VEGF的表达。(6)建立鸡胚胆管癌移植模型,观察As2O3对体内肿瘤生长的影响,用SABC方法检测肿瘤组织VEGF、PCNA的表达,TUNEL方法测定肿瘤组织凋亡。 结果发现:(1)在0.75卜3。**~12卜3。UL范围内,随着ASZO3浓度的增加或作用时间的延长,QBC939增殖和克隆形成受到显著抑制;体外检测药物敏感性依次为 ADM,ASZO3,DDP,VCR,MMC,5-Fll,VP-16。Q)As。O。诱导 QBC939细胞M亡有时rdJ和浓度依赖性,在 6 11 mO凡72h组凋亡指数达34.413二8%,FCM检测结果ASZO3阻滞细胞周期,GI期减少,S期和 GZ期增加。(3)AS。O。抑制 QBC939细胞的侵袭力和运动能力。(4)细胞免疫组化bC12、PCNA、CPA表达降低。(5)ASZO3抑制ECV304细胞增殖并诱导凋亡;QBC939细胞条件培养液促进ECV304细胞的增殖,ASZO3抑制这种促增殖作用:ASZO3抑制血管生成。(6)ASZO3有效抑制荷瘤鸡胚胆管癌的生长,肿瘤组织PCNA、VEGF表达降低,TmEL检测凋亡增多。 临床治疗 APL病人 ASZO3的血浆峰值浓度范围是 4.2 11 3O凡~6.7 11mo叽,在此范围之内,Aszoa显著抑制 QBC939细胞增殖动力学,抑制荷瘤鸡胚胆管癌的生长:与AD M、**P等属敏感性较高的化疗药物。与大多数化疗药物一样,AS。O3通过抑制肿瘤细胞的增殖产生疗效,而且存在细胞周期特异性。癌细胞侵袭和肿瘤血管生成在肿瘤的发生发展中极其重要,ASZO3在这两个重要环节上都有抑制作用。 因此,ASZO3能有效的、多机制的抗胆管癌,据临床治疗的APL的安全性,认为可供胆管癌治疗的选择应用。