论文部分内容阅读
犬Ⅰ型腺病毒(Canine adenovirus type 1,CAV-1)感染犬可引起犬传染性肝炎(Infectious canine hepatitis,ICH),该病具有传染性强、发病率高、致死率高的特点,对犬养殖业造成了极大的危害和经济损失。本研究旨在建立CAV-1犬感染模型,以对评价ICH疫苗以及药物的疗效提供参考。首先,本实验建立了一系列CAV-1的检测手段,包括分子生物学检测方法PCR和定量PCR以及用于血清抗体检测的血清学检测方法间接免疫荧光试验(Indirect immunoinfluscent assay,IFA)和血凝抑制(Hemagglutnation inhibition,HI)试验。其次,我们利用普通级2月龄比格犬建立感染模型。对犬进行肌肉注射接种CAV-1同剂量(105.7.7 TCID50/2 mL)感染后,对其排毒情况、组织带毒、病毒血症进行检测。结果表明,三只攻毒犬出现不同程度的临床症状、大体病变和组织学病毒分布:1、母源抗体水平低、体重轻的犬临床症状最明显,体温升高最快并出现血便,体内病毒扩散最广,组织中病毒含量最高;2、母源抗体水平低、体重大或母源抗体水平高、体重轻的犬均未见明显的临床症状;3、病毒的组织学分布程度说明在建立犬感染CAV-1模型时应考虑单位体重的病毒接种剂量和犬的母源抗体,即在制备和评估发病模型时,必须考虑实验动物的本底质量。利用普通级2月龄比格犬建立感染模型,通过后肢肌肉注射105.2TCID50/kg犬腺病毒I型CAV-1株。各项指标显示,体温于2 dpi达到最高值;临床症状显示2 dpi有便血,6 dpi有轻度腹泻;排毒情况:于10 dpi口腔开始出现排毒情况;血液中病毒检测于3 dpi病毒含量达到最高;病毒主要组织分布于胸腺,腹股沟淋巴结,颌下淋巴结,肠系膜淋巴结,肝脏;血清抗体HI效价为1:320。为了探究CAV-1感染犬体内发挥主导作用及有潜力药用价值的干扰素(Interferon,IFN)类型,我们先后对体外CAV-1感染的犬肾上皮细胞系(Madin darby canine kidney,MDCK)、体内CAV-1感染比格犬的血液及肝脏中各干扰素转录水平进行了检测。结果表明,在体外,CAV-1处理的MDCK细胞中IFN-α转录水平较高,Poly I:C处理的MDCK细胞中IFN-λ1、IFN-λ3转录水平较高,并且可能先后发挥着重要作用。对于体内,感染犬的血液中干扰素受体分子IFN-βR、IFN-λ1R和IFN-λ3R最先开始大量转录,而肝脏中IFN-λ1R转录水平较高。本研究表明在治疗犬传染性肝炎发病犬时,应更多考虑III型干扰素的作用。