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本实验采用大鼠喂服低剂量棉酚与甾体激素联合用药(棉酚(G,Gossypol aceticacid)12.5mg/(kg·d)+去氧孕烯(DSG,Desogestrel)125μg/(kg·d)+炔雌醇(EE,Ethinyl estradiol)25μg/(kg·d)+十一酸睾丸酮(TU,Testosterone undecanoate)100mg/(kg·d))的方式,与单独喂服相同剂量的棉酚或甾体激素的大鼠及喂服甲基纤维素溶剂的大鼠相对照,通过TUNEL染色,观察生精细胞凋亡的情况;通过免疫组织化学染色和免疫印迹,观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的变化,以期发现iNOS在生精细胞凋亡中的作用;通过免疫组织化学染色和免疫印迹,观察骨桥蛋白(OPN),这一细胞间连接分子的表达变化。本实验结果包括两部分:生精细胞凋亡和iNOS蛋白表达的变化,OPN表达的变化。TUNEL染色显示,在正常对照组(C组),阳性着色主要分布在Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ期生精小管的残余体中,偶见于粗线期精母细胞中。棉甾联合用药组(GH组)和激素组(H组),阳性着色主要分布在粗线期精母细胞中,随用药时间的延长,阳性着色的细胞数量增多(P＜0.01)。免疫组织化学染色显示,在正常对照组,iNOS在残余体、精原细胞和粗线期精母细胞中的表达具有期依赖性。在Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ期生精小管,iNOS主要在残余体中表达;在Ⅸ-Ⅻ期生精小管,精原细胞和粗线期精母细胞的核中可见少量表达。在棉甾联合用药组,iNOS在残余体中的表达,随用药时间的延长表达量降低(P＜0.05);iNOS在粗线期精母细胞、精原细胞细胞细胞核中的表达,随用药时间的延长表达量增高(P＜0.05)。iNOS在正常对照组的间质细胞中持续表达,棉甾联合用药组4周降至最低,4,6和8周表达量无统计学差别。本试验提示:iNOS蛋白在低剂量棉酚与甾体激素联合应用大鼠睾丸中各部位的表达变化趋势不一致,分别产生不同的功能;凋亡的生精细胞数量增加,可能与iNOS的表达增多有关。免疫组织化学染色显示,在正常对照组,OPN阳性着色主要分布在间质细胞的细胞质,强表达;在基底部细胞连接处,精原细胞、前细线期精母细胞、细线期精母细胞、支持细胞细胞质、精子细胞顶体部、各级生殖细胞与支持细胞连接处,都有表达。棉酚组(G组)OPN的表达与对照组相似。棉甾联合用药和激素组中,OPN的表达变化趋势相似,表达位置与对照组同。OPN在间质细胞细胞质中的表达,随用药时间的延长表达量降低(P＜0.05);在基底细胞连接处的表达随用药时间的延长表达量增强;在各级生精细胞与支持细胞连接处的表达,随用药时间的延长表达量呈先增高后降低的趋势。免疫印迹的结果显示,对照组各时间点OPN的表达量基本一致,棉酚组OPN蛋白表达与对照组相似。激素组和棉甾联合用药组表达量呈增强趋势,特别是棉甾联合用药组,在4、6周时表达量很低,8周较前增强明显。综上所述,棉甾联合用药抗生育过程中会引起生精细胞凋亡增多,可能与iNOS蛋白表达的增多有关。OPN作为一种细胞外连接分子,随用药时间的延长,在其底部细胞连接处表达增多,可能起到保护基底部精原细胞的作用;随生精细胞脱落的增多,局部有OPN的代偿性表达增多。