论文部分内容阅读
目的:探讨初诊AML患者白血病细胞免疫表型及基因突变的特点。本研究分为二部分,第一部分研究白血病细胞免疫表型对AML患者预后的影响;第二部分研究急性髓系白血病基因突变的临床特征和基因分布特点。第一部分急性髓系白血病免疫表型与预后的相关性方法:收集在本院确诊为急性髓系白血病的初诊患者140例,混合型白血病8例的临床一般资料并进行整理,对研究者骨髓进行流式细胞术分析其免疫表型。根据不同类型的白血病给予标准化的化疗,其中急性髓系白血病患者给予DA或IA治疗的方案,但此方案不包括M3,M3可使用三氧化二砷联合维甲酸的方案;混合型白血病患者给予TOAP或DOLP方案进行治疗,比较两种不同类型的白血病的疗效,对各免疫表型阳性与阴性之间的表达是否具有差异性。结果:1.140例急性髓系白血病患者中,M2和M4占比分别为23.6%和24.3%,比例最高。在急性髓系白血病患者中,CD13和CD33阳性率最高,在髓系抗原表达中占比分别为80.0%和82.9%,其次是CD64占比为72.1%,CD34占比为60.0%。CD38、CD13、CD33、CD117和CD123在AML中的抗原表达率占据比例均较高;M4、M5中CD64的抗原表达率较高;CD11b在M4和M5中分别有15例和20例抗原表达,占据较高;M3中CD56占据较高。M3患者中CD13和CD33的表达比其他亚型患者要高,CD56和CD2较常见表达。2.在满足本研究疗效判定标准的95例急性髓系白血病的患者中,CD7和CD19与CD34和CD38的在抗原表达上都均一致较高,CD19+的13例急性髓系白血病患者中有12例是CD34+阳性,占据比例为92.3%,HLA-DR+有10例阳性,占据76.9%,CD38+有9例,占据为69.2%;,CD7+的29例急性髓系白血病患者中有23例是CD34+阳性,占据比例为79.3%,HLA-DR+有22例阳性,占据75.9%,CD38+有21例,占据为72.4%。3.在AML-M1中,CD34、HLA-DR表现出较高的阳性表达水平,但在其他白血病亚型中较低,CD34和HLA-DR在M3中地表达或不表达,这说明在急性髓系白血病中CD34和HLA-DR的表达与细胞分化程度具有一定的相关性。4.可进行疗效评估的95例急性髓系白血病患者中,有55例获得了CR,缓解率为57.9%,在5例混合型白血病中,2例获得CR,缓解率为40%,低于其他白血病的完全缓解率,但数据无明显差异（P＞0.05）。5.CD33阳性的AML完全缓解率低于阴性但无统计学差异（P＞0.05）;CD13阳性的完全缓解率高于阴性但无统计学差异（P＞0.05）;CD56阳性的完全缓解率高于阴性但无统计标准（P＞0.05）;CD7阳性的完全缓解率低于阴性但无统计学差异（P＞0.05）;CD19阳性的完全缓解率高于阴性,具有统计学差异（P＜0.05）。6.CD34+CD7+AML的完全缓解率为34.8%,低于CD34+CD7-AML（完全缓解率78.6%）,结果具有差异性（P＜0.05）;CD34+CD19+完全缓解率83.3%高于CD34+CD19-完全缓解率50%。结果具有差异性（P＜0.05）;CD34+CD11b+完全缓解率47.9%低于Ly-完全缓解率69.6%。结果具有差异性（P＜0.05）;CD56+CD11b+完全缓解率82.5%低于CD56-CD11b-完全缓解率83.3%。结果不具有可比性（P＞0.05）结论:1.对白血病细胞行免疫表型检测有助于急性白血病分型,具有很大的辅助诊断价值。CD13和CD33在急性髓系白血病中具有较高的表达,CD34和HLA-DR的双阴性可作为诊断M3特异性的免疫表型的标准。2.CD7与CD19等淋系抗原可在急性髓系白血病中表达,但Ly-的化疗效果差,CD34+CD7+、CD34+CD19+、CD34+CD11b+对白血病的预后判断有一定的指导意义。3.髓系和淋系抗原双表达是急性混合型白血病的特征,但是疗效较差。第二部分急性髓系白血病基因突变的特点方法:此次研究对象为第一部分的研究对象,确诊为急性髓系白血病的患者140例,应用高通量二代测序技术检测患者的基因突变并对其特点进行分析,查看不同年龄AML患者的基因突变的特点。结果:1.对所有研究对象检测基因突变,发生基因突变的有131例,发生单基因突变的有28例,2个基因突变的有22例,3个基因突变的有24例,4个基因突变的有21例,大于5个基因突变的有36例,分别占总数的21.4%、16.8%、18.3%、16.0%、27.5%。2.基因突变率在10%以上的突变基因依次为NPM1、DNMT3A、NRAS、TET2、CEBPA、WT1、GATA2、FLT3-ITD、FLT3-TKD、ASXL1。3.经过研究发现,NPM1和DNMT3A、NPM1和FLT3、PLT3和DNMT3A、IDHI/2和NPM1、CEBPA和GATA2、ASXL1和RUNX1、NRAS和NRAS基因突变之间相互发生,结果具有显著性（P＜0.05）;PLT3和KIT、NPM1和RUNX1、TET2和IDH1/2、KRAS和FLT3、RUNX1和FLT3、RUNX1和CEBPA、RUNX1和WT1、IDH1/2和WT1、IDH1/2和CEBPA、IDH1/2和GATA2、KIT和IDH1/2、KIT和KRAS/NRAS、KIT和WT1、KIT和THT2之间相互排斥,但结果不具有差异性（P＞0.05）。4.60以下的年轻患者有87例,占总数的62.1%,其中DNMT3A的基因最高,有21例,占比为24.1%;20例NRAS基因突变,占比为23.0%;19例NPM1突变基因,占比为21.8%;15例CEBPA突变基因,占比为17.2%;14例WT1突变基因,占比为16.1%。60以上（包含60岁）的年轻患者有53例,占总数的37.9%,其中TET2的基因最高,有16例,占比为30.1%;14例NPM1基因突变,占比为26.4%;14例DNMT3A突变基因,占比为26.4%;10例CEBPA突变基因,占比为18.9%。5.在本次研究中,≥60岁以上的急性髓系白血病患者中ASXL1突变、TET2突变、SRSF2、TP53、BCORL1突变比＜60岁患者中的频率高,结果具有差异性（P＜0.05）;6.WT1和GATA2在＜60岁患者中比≥60岁患者有明显增高,但结果不具有差异性（P＞0.05）。DNA甲基化、染色体修饰基因、髓系转录因子、RNA剪接因子在不同年龄具有统计学差异（P＜0.05）;7.C-KIT突变在预后良好AML患者中发生率较高,占比为25%;NPM1突变在预后良好AML患者中占比较高,为31.25%;TP53突变在预后不良AML患者中占比较高,为15%。NPM1、DNMT3A、C-KIT、TP53在三组中具有差异性,且NPM1、DNMT3A常见于预后中等AML患者（P＜0.05）。结论:1.急性髓系白血病在不同年龄阶段的突变频率不同,在60岁以上的患者中最常见的是TET2、ASXL1、SRSF2、TP53及BCORL1突变基因;在60岁以下最常见的WT1和GATA2突变基因。2.急性髓系白血病突变基因可相互排斥和共发突变。3.年龄不同,其基因突变的功能分类有差异性。在60岁以上最常见的是DNA甲基化、染色体修饰基因、RNA剪接基因及肿瘤抑制基因;在60岁以下最常见髓系转录因子。4.不同核型的AML患者基因突变的发生类型及频率不同。C-KIT突变在预后良好AML患者种最常见,NPM1突变在预后良好AML患者中最常见,TP53突变在预后不良AML患者中最常见。