盐霉素通过下调PGE2的表达促进DU145细胞凋亡和抑制微球体成

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目的:观察盐霉素对前列腺癌DU145细胞PGE2及PGE2下游受体表达的影响;以及在加入不同浓度外源性PGE2后,盐霉素对DU145细胞凋亡和肿瘤微球体形成的影响,为将盐霉素进一步研发成为治疗前列腺癌的有效药物提供实验依据。材料与方法:(1)盐霉素对DU145细胞PGE2及PGE2下游受体表达的影响:用浓度分别为2.5μM、5.0μM、10.0μM、15.0μM的盐霉素处理前列腺癌DU145细胞,空白组及DMSO组作为对照,处理24小时后用ELISA法检测PGE2的表达水平,Western-Blot法检测PGE2下游受体EP1、EP2、EP3、EP4的表达水平。(2)加入外源性PGE2后,盐霉素对DU145细胞凋亡的影响:用5.0μM盐霉素联合浓度分别为0.5μM、1.0μM、2.0μM的外源性PGE2处理DU145细胞,设置空白组、DMSO组、5.0μM盐霉素组作为对照,24小时后行AO-EB染色,在荧光显微镜下观察细胞凋亡情况。(3)加入外源性PGE2后,盐霉素对DU145细胞肿瘤微球体形成的影响:将DU145细胞接种于去除生长因子和粘附因子的无血清培养基中,用5.0μM盐霉素联合浓度分别为0.5μM、1.0μM、2.0μM的外源性PGE2进行处理,设置空白组、DMSO组、5.0μM盐霉素组作为对照,细胞培养7天后在显微镜下观察并统计各组微球体形成情况。结果:(1)空白组、DMSO组、2.5μM、5.0μM、10.0μM、15.0μM盐霉素处理组DU145细胞的PGE2表达水平分别为142.0±5.1 pg/ml、138.0±4.6pg/ml、118.0±3.9 pg/ml、87.0±2.7 pg/ml、52.0±4.2 p g/ml、42.0±2.8pg/ml,与空白组和DMSO组相比,各盐霉素处理组PGE2表达下调,差异具有统计学意义(p<0.05);盐霉素浓度越高,PGE2表达下调越明显,各组之间的差异具有统计学意义(p<0.05);各组DU145细胞EP1、EP3、EP4的表达无明显变化,差异无统计学意义(p>0.05);各盐霉素处理组EP2的表达较空白组和D MSO组下调,差异具有统计学意义(p<0.05);盐霉素浓度越高,EP2表达下调越明显,各组之间的差异具有统计学意义(p<0.05)。(2)空白组、DMSO组、5μM盐霉素组DU145细胞凋亡率分别为(12.0±3.0)%、(11.0±1.5)%和(84.2±4.0)%,与空白组和DMSO组相比,5μM盐霉素组的细胞凋亡率升高,差异具有统计学意义(p<0.05);5μM盐霉素联合0.5μM、1.0μM、2.0μM外源性PGE2组的细胞凋亡率分别为(76.2±3.7)%、(33.8±3.8)%和(19.5±4.3)%,与5μM盐霉素组相比,5μM盐霉素联合各浓度外源性PGE2处理组的细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(p<0.05)。(3)空白组、D MSO组和5μM盐霉素组平均每个低倍镜视野的微球体数目分别为13.2±1.7、12.7±1.9、0.9±0.5个,与空白组和DMSO组相比,5μM盐霉素组肿瘤微球体形成数目减少,差异具有统计学意义(p<0.05);5μM盐霉素联合0.5μM、1.0μM和2.0μM外源性PGE2组平均每个低倍镜视野的微球体形成数目分别为:3.7±0.6、6.3±1.3、8.7±1.2个,与5μM盐霉素组相比,5μM盐霉素联合各浓度外源性PGE2处理组的DU145细胞肿瘤微球体形成数目增加,差异具有统计学意义(p<0.05)。结论:(1)盐霉素可以下调PGE2及其下游受体EP2的表达;(2)盐霉素可能通过下调PGE2的表达促进前列腺癌DU145细胞的凋亡。(3)盐霉素可能通过下调PGE2的表达抑制DU145细胞肿瘤微球体的形成。
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