流感病毒NP蛋白与宿主蛋白SNRPA的相互作用研究

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流感病毒即流行性感冒病毒,是引起人类疾病和死亡的重要病原之一。流感病毒属于正粘病毒科流感病毒属,根据流感病毒核蛋白NP和基质蛋白M1的抗原性差异,可将流感病毒分为A型、B型和C型。A型流感是一种家禽和野禽的高度接触性急性传染病,也可引起人类感染和死亡,是一种重大的人畜共患传染病,严重影响畜牧业发展并对人类健康造成巨大的威胁。A型流感病毒基因组为8个片段的单股负链RNA,分别编码不同的蛋白,其中,NP蛋白由第5片段编码,是流感病毒主要的结构蛋白,能与病毒基因组RNA及RNA聚合酶三聚体(PB2、PB1、PA)结合构成vRNP,参与vRNP的入核、出核以及病毒基因组的转录与复制。此外,NP能够通过与多种宿主蛋白相互作用来完成对不同信号通路的调节,在病毒复制周期中发挥至关重要的作用。NP互作蛋白的研究为病毒致病机理的深入探讨以及进一步研发抗流感病毒药物提供科学依据。  本研究选取利用酵母双杂交技术筛选到的与NP蛋白相互作用的宿主蛋白SNRPA作为研究对象,该蛋白是一种剪接体蛋白,具有多种功能,能够结合U1 snRNA的主干Ⅱ环,并在mRNA前体剪接和多聚的过程中发挥重要作用。SNRPA能够与黄热病毒的NS5蛋白相互作用,影响NS5蛋白的出入核。本研究首先进行了酵母回交验证试验,证实NP和SNRPA在酵母系统中存在特异相互作用,进而采用Co-IP和GSTpulldown试验证实两者在哺乳动物细胞中的互作,激光共聚焦试验证实SNRPA能够与NP蛋白共定位于A549细胞的细胞质中。通过siRNA干扰SNRPA基因的蛋白表达后能够抑制流感病毒的复制,通过建立SNRPA过表达细胞系上调蛋白表达能够促进流感病毒的复制,表明SNRPA与NP蛋白的相互作用对流感病毒的复制发挥正调控作用。本研究进一步丰富了流感病毒和宿主之间的相互作用网络、并为进一步揭示流感病毒致病机制以及新型抗流感药物的研发奠定了基础。
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