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中药复方配伍是中医药领域研究的难点问题,是中医辨证论治精髓的具体表现形式。中药复方由两味或两味以上的单味药组成,在中医理论指导下,选择合适的药物酌定药量,按照“辩证施治”的原则组方,它集中体现了中医理论治法治则、配伍理论和组方原则,是中医防治疾病的主要形式[1,2]。而药对是中药复方中最简单、最基本的药物组方形式,符合复方中“辩证施治”、“七情和合”,体现了复方的有效性和合理性,可通过研究药对配伍来揭示复方配伍的科学性和合理性,君-使药对是中药复方中的特殊对药,能体现中医药的配伍关系且组分比较简单,易于研究。因此,研究君使药对之间的相互作用及其机制,对揭示中药复方配伍规律,继承和发展中医药有重要意义。本文从简单的药对研究出发,选择了冠心丹参滴丸方中作为佐使药的降香,其含有的挥发油和黄酮-柚皮素对君药丹参中的隐丹参酮和丹酚酸B的吸收动力学影响及其促吸收机制展开研究,主要内容如下:第一部分:隐丹参酮在生物样品中测定方法的建立为本课题体内、外相关的研究,建立了简便、灵敏、可靠、无干扰的检测隐丹参酮(Cryptotanshinone,CTS)在Caco-2细胞(the hunman colon carcinoma cellline,人结肠癌细胞)中的UPLC方法、在大鼠血浆中LC-MS/MS方法,以及在丹参浸膏药液中的HPLC方法。实验结果显示,Caco-2细胞样品中:CTS与内标分离较好,线性范围为5～640ng/mL,最低定量限为5 ng/mL,标准曲线相关系数r>0.99,批内批间变异系数小于13%,方法回收率大于90%,质控样品、冻融稳定性均符合要求。大鼠血浆样品中:CTS与内标分离较好,线性范围为2.5～2400ng/mL,最低定量限为2.5ng/mL,标准曲线相关系数r>0.99,提取回收率大于70%,质控样品、冻融稳定性、基质效应均符合要求。所建立的测定方法均符合生物样品的测定要求,并具有简便、灵敏、稳定、无干扰的优点。第二部分:使药降香对君药丹参中的隐丹参酮和丹酚酸B的吸收动力学影响在整体试验上,对降香挥发油、黄酮促进CTS和SalB在大鼠体内的吸收进行了较为系统的研究。运用HPLC法对丹参浸膏中的CTS和SalB的含量进行了测定,以及用气相和气-质联用技术对降香挥发油中的含量和成分进行了检测,考察了大鼠灌服丹参浸膏和浸膏-挥发油后,CTS和SalB药代动力学过程的差异。实验结果显示:测得浸膏中CTS为1.175±0.472mg/g,SalB为26.089±4.718mg/g,用气相和气-质色谱对降香中的挥发油进行了含量和成分的测定,共鉴定出5种物质,其中橙花叔醇含量最高,经面积归一化法计算,标准品中的含量约占总挥发油的56.30% ,饱和挥发油Hanks’液中,检测出的橙花叔醇的含量约占46.53%,饱和挥发油培养基中,橙花叔醇含量49.84%。通过单药组和合药组数据统计对比显示,加入降香挥发油和柚皮素后t1/2α、t1/2β、AUC、Cmax、V1/F、CL/F有显著性差异,降香挥发油和柚皮素的存在,使CTS和SalB在体内吸收入血量增加,在体内消除减慢并向组织中分布增加,从而印证了使药降香的增效-导向作用,为降香的促吸收机制提供了依据。第三部分:降香挥发油和降香黄酮-柚皮素对隐丹参酮和丹酚酸B分别在Caco-2和MDCK细胞中的摄取影响本部分的研究目的是建立了Caco-2和MDCK细胞的药物摄取体外模型,在此模型基础上对CTS和SalB的摄取特性,及降香挥发油、柚皮素对CTS和SalB摄取特性影响进行了较系统的研究,并以细胞形态学的观察、Rh123双向转运实验进行模型验证,并在此模型上,加入CsA(50μM)考察对CTS和SalB摄取的影响。实验结果显示,Caco-2单层细胞膜具有完整性、致密性,P-gp转运体存在着明显的蛋白表达并具有良好的功能活性,揭示Caco-2细胞保持了小肠上皮细胞的特性,适用于药物摄取实验研究。CTS和SalB在Caco-2和MDCK细胞中的摄取量随时间延长而增加,37℃的CTS和SalB的摄取量明显高于4℃时的摄取量。CTS和SalB与降香挥发油分别合用后,在Caco-2细胞中CTS摄取达峰时间提前,由60min提前到45min,吸收速率加快,坪值增加,吸收程度提高,40min时摄取量增加了85.6%,60min增加了36.6%;在MDCK细胞中,由于降香挥发油的存在,CTS摄取量40min增加了61.8%,60min增加了48.7%。在CsA存在下,CTS和SalB的摄取量有增加趋势,CTS增加21%,SalB增加了16.94%,提示P-gp可能参与了CTS和SalB的摄取,CTS和SalB可能为P-gp的底物。Western Blot显示挥发油对P-gp表达基本无影响,降香黄酮具有下调P-gp表达的作用。以上结果表明,CTS和SalB的摄取具有时间、温度、浓度依赖性,CTS和SalB在小肠中的吸收机制以主动转运为为主,有被动扩散的参与;降香挥发油能非特异性的促进CTS和SalB在小肠的吸收;降香中的柚皮素能特异性的作用于P-gp,从而促进CTS和SalB在小肠的吸收。