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柿(Diospyros kaki)一般分为涩柿和甜柿,主栽品种多为涩柿,采后须经人工脱涩后才能食用。本文以4个涩柿品种(’磨盘柿’、’镜面柿’、‘刀根早生’、’恭城水柿’)为材料,通过采后AHCA处理(95%CO2+1%O2,常称为高CO2处理)脱涩,利用RNA-seq数据分析和DkPDC2(关键靶标基因之一)启动子筛库实验,鉴别了介入柿果实采后脱涩的转录因子,并解析它们的作用机制,进一步丰富柿果实采后脱涩的转录调控机制。主要结果如下:1.基于转录组,发现了参与柿果实采后脱涩的DkMYB/DkERF转录级联效应。研究发现AHCA处理能够诱导柿果实乙醇乙醛的积累,进而导致可溶性单宁含量的降低,实现柿果实脱涩。通过RNA-seq筛选并通过实时定量PCR验证得到柿果实采后脱涩过程中9个受AHCA处理诱导表达的转录因子,进一步通过双荧光素酶体系和酵母单杂交以及点突变技术,发现DkMYB10可以直接结合DkERF9启动子并诱导其活性,DkERF21和DkERF22可以间接激活DkERF10启动子活性,DkERF18、DkERL19和DkMYB6可以直接结合DkERF19启动子并激活其活性,果实圆片瞬时表达发现,与对照相比,DkMYB6、DkMYB10、DkERF18和DkERF19可以显著降低柿果实圆片中可溶性单宁含量并诱导下游靶标基因(目标DkERF转录因子)的表达,表明这些转录因子通过TF-TF的级联效应参与了柿果实采后脱涩进程。2.基于酵母单杂筛库,发现了参与柿果实采后脱涩的DkWRKY/DkERF转录因子复合体。在RNA-seq数据分析基础上,进一步通过DkPDC2启动子筛库得到了 3个新型的ERF-IX亚家族的转录调控因子DkERF23/24/25,以及2个具有调控效应的WRKY转录因子DkWRKY1/7,且AHCA处理均能诱导其表达。进一步通过烟草双荧光素酶体系、酵母双杂交和BiFC体系验证DkERF24与DkWRKY1对DkPDC2启动子调控存在协同增效效应,且两者之间存在蛋白-蛋白互作关系。同样的实验现象在拟南芥同源基因中同样存在(AtERF1和AtWRKY53)。综上所述,本论文发现了受AHCA处理诱导的转录因子间(主要为MYB和ERF)的通过TF-TF的信号级联传递效应参与柿果实的采后脱涩调控;也发现了参与柿果实采后脱涩的转录因子复合体(WRKY与ERF)及其协同调控现象。这些结果在前期转录调控的基础上,进一步揭示了柿果实采后脱涩的新型调控机制,也进一步丰富了植物响应高CO2/低氧胁迫的分子机理。