猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV）所引起的疾病。由于感染该疾病会导致猪严重的生殖与呼吸障碍,因此每年该病对全球养猪业造成巨大的经济损失。猪繁殖与呼吸综合征病毒属于套式病毒目（Nidovirales）的动脉炎病毒科（Arteriviridae）。其基因组长度约为15kb,根据其基因和抗原表位的区别,PRRSV被分为欧洲型（Ι型）和北美型（Ⅱ型）。PRRSV的主要宿主细胞为猪肺泡巨噬细胞（porcine alveolar macrophage,PAM）。PRRSV主要与细胞表面的硫酸乙酰肝素（Heparan sulp Hate,HS）和唾液酸黏附素（sialoadhesin,Sn）蛋白结合,并通过网格蛋白介导的内吞作用入侵宿主细胞。利用针对PRRSV囊膜蛋白（glycoprotein5,GP5）的抗独特型抗体Mab2-5G2,本课题组早期从PRRSV易感细胞中发现一个可能为PRRSV受体的蛋白-非肌肉肌球蛋白II型重链A（non-muscle myosin heavy chain II-A,MYH9）。本课题组前期验证了MYH9的羧基端蛋白（命名为PRA）具有在体外阻断PRRSV感染的功能,并且PRA蛋白可以特异性的结合RRRSV的囊膜蛋白GP5。但PRA蛋白阻断病毒感染的关键区域尚未清楚,因此本研究主要探索PRA参与猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞的关键区域,本研究的主要工作内容为:1.根据猪源PRA核苷酸序列,设计引物,扩增不同的PRA截短片段,插入p Cold-SUMO原核表达载体,经低温诱导表达不同PRA截短片段,通过亲和层析纯化获得无标签且纯度较高的PRA截短片段。2.将PRA的截短片段与PRRSV共孵育,转移至宿主细胞中,验证蛋白对病毒增殖的影响。本研究通过Western blot检测宿主细胞内PRRSV的N蛋白表达量,通过荧光定量PCR法检测宿主细胞内PRRSV的m RNA表达量。用上述两种方法在低摩尔浓度下做检测,找出阻断病毒感染的关键区域并验证其阻断PRRSV感染的广谱性。3.利用间接ELISA验证这个蛋白的关键区域结合病毒颗粒。实验结果表明,PRA蛋白近氨基端部分116个氨基酸(1676-1791,命名为PRA1676-1791)为阻断病毒感染细胞的关键区域,全部或部分包含该区域的截短PRA蛋白在低摩尔浓度时均可有效的阻断PRRSV-SD16感染。并且PRA1676-1791具有广谱阻断病毒感染的能力,可阻断PRRSVⅠ型和Ⅱ型的毒株感Marc-145细胞和PAM细胞。最后通过间接ELISA验证该功能区域可结合病毒粒子。