【摘 要】
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POCT(point of care testing)分析仪具有快速、便捷、成本低、易于操作等特点,有着广阔的应用前景和发展空间。血糖仪和尿酸仪是目前最为常见的便携式POCT分析仪,但它们往往局
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POCT(point of care testing)分析仪具有快速、便捷、成本低、易于操作等特点,有着广阔的应用前景和发展空间。血糖仪和尿酸仪是目前最为常见的便携式POCT分析仪,但它们往往局限于单一目标物(葡萄糖或者尿酸)的检测,这远远不能满足人们的需求。本文利用酶-DNA复合物催化底物(蔗糖或黄嘌呤)生成葡萄糖或尿酸,使得这两种便携式POCT分析仪与其它检测对象之间建立关联,发展了基于便携式POCT分析仪的DNA和肌红蛋白的检测新方法。具体研究工作如下:
1.基于尿酸仪与黄嘌呤氧化酶-DNA复合物实现DNA的高灵敏检测
合成了黄嘌呤氧化酶-DNA复合物,以p53 DNA和HBV DNA为目标分子,利用尿酸仪发展了DNA检测新方法。当目标DNA存在时,固定化的捕获探针、目标DNA和黄嘌呤氧化酶-DNA复合物三者形成夹心式结构,然后通过黄嘌呤氧化酶催化氧化黄嘌呤生成尿酸。利用尿酸仪检测酶催化生成的尿酸浓度,即可反映目标DNA的浓度。该方法灵敏度高,选择性好,对DNA检测有通用性,其检测下限低至pmol/L。同时,该方法可用于血清样品中DNA的检测,并通过使用微孔阵列式芯片同时检测多个样品。
2.基于血糖仪与蔗糖酶-核酸适配体复合物实现肌红蛋白的高灵敏检测
优化了肌红蛋白核酸适配体的序列,合成了蔗糖酶-核酸适配体复合物,利用血糖仪发展了肌红蛋白检测新方法。该方法利用酶标板表面固定的抗体捕获肌红蛋白,并与蔗糖酶-核酸适配体复合物形成夹心式结构。通过蔗糖酶催化蔗糖生成葡萄糖,可将肌红蛋白的含量与血糖仪的信号值联系起来。该方法利用酶的催化作用实现信号的放大,实现了肌红蛋白的高灵敏检测,其检测下限为50 pmol/L。该方法的选择性较好,可用于血清样品中肌红蛋白的检测。
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