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目的探究中介素(intermedin IMD)对大鼠脑缺血再灌注中氧化应激及自噬的影响及其作用机制,为临床预防脑缺血性再灌注提供一种全新的思路。方法SPF级健康SD雄性大鼠160只,6—7周,体重:260±10g,动物饲养单元温度是20-25℃。相对湿度50%-60%;无强光强噪音刺激,给予适量干燥饲料及清洁饮用水,每隔2天更换垫料一次;喂养过程中生存状态良好,未出现伤病及疫情发生。所有大鼠按实验要求随机分为4组,空白组(Sham组):n=40;模型组(I/R组):n=40,IMD组(100 mg/kg):n=40;3-MA(200 nmol):n=40。Sham组仅分离动脉,不插入线栓。其余各组进行造模并侧脑室注射,在缺血1.5h拔出线栓再灌注24h。24h后对大鼠进行进行Longa评分后取脑,一部分大鼠直接取脑做冰冻切片及电镜所用切片,或者通过2.5%戊二醛固定或心脏灌注甲醛固定液后取脑制作普通石蜡切片或取脑后做脑进行因子检测,运用Elisa法,HE染色法、TTC染色法、TUNEL染色、免疫组织化学法、Western blot免疫印迹分析法、透射显微镜观察法,检测大鼠脑组织的损伤情况、相关因子(SOD、MDA)活性、蛋白表达(LC-3、Beclin-1、P62)及细胞自噬子情况,观察IMD对大鼠脑缺血再灌注后氧化应激及自噬的影响,研究其对脑的保护作用。结果1行为学指标:通过行为学指标评分,确定脑缺血再灌注模型制备成功。2Elisa法检测:大脑SOD的活力显著低于Sham组(P<0.05),说明脑缺血再灌注后脑组织的抗氧化能力下降,与I/R相比,IMD组的SOD含量增高(P<0.05),说明IMD使脑缺血再灌注后脑组织中的SOD活力有一定的恢复力,阳性对照组3-MA组对SOD的活力影响高于I/R组,I/R组大脑MDA含量与Sham组相比较有显著升高(P<0.05),说明脑缺血再灌注后脑组织脂质过氧化反应非常强烈,伴有抗氧化酶活性的降低和脑自由基的聚集;与I/R相比,IMD组和30MA组的MDA含量显著降低(P<0.05,P<0.01),说明IMD和3-MA对脑缺血再灌注后脑组织脂质过氧化反应的抑制作用强烈。3-MA组作为阳性对照组,与IMD相比没有差异(P>0.05);3 TTC染色:结果显示IMD组和3-MA组比I/R组梗死面积减少,从大体标本上说明模型制备成功。4 HE染色:研究结果显示IMD组和3-MA组与I/R组相比损伤神经元数量减少及水肿较轻的水肿,表明IMD和3-MA对脑缺血再灌注具有保护作用。5 TUNEL染色:结果为IMD组和3-AM组脑梗死灶体积大于Sham组(P<0.05)但小于I/R组(P<0.05),说明自噬对脑缺血再灌注损伤有促进作用,IMD对脑缺血再灌注有保护作用。6免疫组化和Western Blot的定性和定量分析显示:IMD组中的Beclin1和LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ的表达量明显低于模型组,P62增高,说明IMD可使脑缺血再灌注后24h使可减少脑缺血再灌注的自噬并下调再灌注大鼠海马CA-1区的LC-3,Beclin-1表达,减少脑缺血再灌注导致的脑损伤。7电镜观察:结果显示Sham组细胞和膜完整,各种细胞器形态正常无明显改变,染色质分布均匀,未发现自噬体出现;I/R组显示大量不同时期的自噬体和自噬溶酶体,线粒体出现肿胀,破裂,可见空泡形成,各级溶酶体显著增多,可见大量变形次级溶酶体,出现很多高尔基体分裂,研究结果说明大脑中动脉缺血再灌注时发生严重的自噬反应,各级溶酶体增多,并可见大量变形次级溶酶体;IMD组和3-AM组中可见处于不同时期的自噬体,线粒体肿胀,膜破裂,可见空泡,各级溶酶体显著增多,可见变形次级溶酶体,高尔基体分裂;相比于IMD组和3-AM组,I/R组的自噬体及各级溶酶体数量较多。结论IMD对脑缺血再灌注有保护作用,可以使脑缺血再灌注的损伤程度减弱。免疫组化和Western Blot的定性和定量分析显示IMD组中的Beclin1、和LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ的表达量明显低于模型组,P62增高,说明IMD可减少脑缺血再灌注的自噬并下调再灌注大鼠皮质区的LC-3,Beclin-1表达,减少脑缺血再灌注导致的脑损伤。