家福捕鸟蛛毒素分子多样性和活性分析

来源 :湖南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huawei_2009
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
家福捕鸟蛛(Selenocosmia jiafu是一种生活在中国广西、云南等地的蜘蛛新种。该种蜘蛛中等个体,产毒量较大和毒性较强。它的毒液中含有许多不同生物学活性的成分,为了更好地开发利用该种生物资源,我们对其毒素进行了初步的研究。  首先,对家福捕鸟蛛粗毒的组成和活性进行了分析。采用反相高效液相色谱和基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱对家福捕鸟蛛粗毒的多样性进了分析。结果表明:家福捕鸟蛛粗毒经反相高效液相色谱分离后得到40多个色谱峰,经质谱鉴定得到238个多肽分子,且多肽分子量呈现出双峰分布,其中62.5%多肽分布在3000至4500Da之间,33.2%多肽毒素分布1000-3000 Da之间。这种分子量的分布模式不同于其它塔兰图拉蜘蛛粗毒中多肽的分布模式。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果表明:除了分子量在10000Da以下的分子,粗毒在50KDA、72KDA和90KDA附近有三条明显的条带。条带经质谱鉴定,主要是一些血蓝蛋白、钾离子通道蛋白、角蛋白、钙蛋白酶等。虽然粗毒对美洲蜚蠊的半致死剂量为85.90μg/g体重,但粗毒对小鼠毒性不明显,当注射剂量达到10 mg/kg体重时小鼠没有发现明显的中毒症状。采用全细胞膜片钳技术,测定了家福捕鸟蛛粗毒对DRG细胞电压门控钠、钾和钙离子通道的活性。结果表明:粗毒对DRG细胞上河豚毒素敏感型钠通道、河豚毒素不敏感型钠通道、电压门控钾通道、高电压激活钙通道和低电压激活钙通道都具有抑制作用。100μg/mL的粗毒能够抑制64.0%±6.2%河豚毒素敏感型钠电流、46.5%±3.8%河豚毒素不敏感型钠电流、44.2%±5.3%电压门控钾电流和77.7%±9.9%低电压激活的钙电流。50μg/mL的粗毒能够抑制大约74.9%±2.8%高电压激活的钙电流。结果表明家福捕鸟蛛粗毒中可能存在开发为新型药物和离子通道工具试剂的毒素分子。  其次,为了阐明家福捕鸟蛛毒素分子的多样性和遗传进化机制,我们对家福捕鸟蛛毒腺的转录组进行了研究。通过提取家福捕鸟蛛毒腺建立cDNA文库,随机挑取单克隆进行测序,得到752个高质量的EST序列。这些EST序列去冗余后得到257个唯一序列,其中包括61个重叠群和196个单一序列。752条EST序列中编码毒素序列438条,占整个序列的58.24%,与通常细胞蛋白有关的序列220条,占整个序列的29.26%。另外还有94条序列(占整个序列的12.5%)没有匹配到相似的序列或者相似性非常低。438条毒素序列去冗余后得到159条全长的毒素前体肽(含有信号肽,富含酸性氨基酸的中间肽和成熟肽)。利用MEGA5.2软件构建家福捕鸟蛛毒素超家族进化树。家福捕鸟蛛159条前体肽毒素分子分为17个超家族,分别为超家族A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N、O、P和Q,并对这17个超家族的毒素分子的结构和功能进行了分析。另外,对家福捕鸟蛛毒腺转录组中普通细胞蛋白转录子进行了KOG基因注释,鉴定得到了一些与家福捕鸟蛛毒腺毒液分泌和重要生理过程有关的基因。  最后,从家福捕鸟蛛毒液中分离纯化得到了5个毒素分子(JF8、JF15、JF16、JF27和JF28)并进行了电压门控钠通道活性的测定。结果表明JF8、JF16和JF27对DRG细胞上TTX-R通道具有抑制作用;JF28对细菌钠通道具有抑制作用,JF15对Nav1.3通道电流具有延缓失活的作用,对Nav1.4、Nav1.5和Nav1.7通道电流具有抑制作用。
其他文献
无线传感器网络综合了传感器技术、网络技术、无线通信技术和微机电系统技术,是当前国际上备受关注的、由多学科交叉的一个热点领域。由于传感器节点通常运行在工作人员无法
RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RDRP)是RNA病毒增殖复制的重要酶类,具有转录酶和聚合酶的双重活性,即一方面参与mRNA的转录,指导合成病毒增殖复制所需要
在水分短缺、蒸散剧烈、基质养分贫瘠的内蒙古西部,生长着孑遗植物蒙古沙冬青,其不仅具有经济价值,还具有防风固沙、改良和提高土壤及土壤肥力等生态价值。它能与真菌共生改善生
随着硬件设备的不断发展和进步,更高更快的传输速率被人们所重视,随之而来的是市场上USB3.0的涌现。提高传输速率、增大总线功率和输出电流、提供全新的电源管理功能以及向下
中国莲(Nelumbo nucifera Gaertn.)作为地球幸存的冰期以前的古老植物之一,它与水杉被称为"中国的两种绝妙植物".莲种子是经科学鉴定的最长寿和最耐高温的植物种子.莲种子的
表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)生物传感器通过生物传感芯片表面共振角变化来检测分析生物分子之间的相互作用,由于使用光学检测的方法,使SPR生物传感器具有不
视频目标分割是视频信息处理与分析的重要研究内容,是建立有效的视频处理系统,如基于内容的视频检索、视频压缩、目标识别与跟踪等的前提和保证。其目的是将视频划分为时一空
随着数字技术和互联网的发展,数字作品的便利性和不安全性并存;针对这种状况,数字产品的版权保护和数据的安全维护的要求也愈加迫切,数字水印(Digital Watermarking)技术在这
数学教学离不开解题教学,然而解题并不是教学的唯一目的,应当在问题驱动下,巩固学生的数学知识,训练方法,开启心智,驱动思维,促进学生数学思维的发展、数学解题能力的提高.然而目前,教学方法的模式化,教学目标的单一化,教学效果的功利化,都无形地制约和影响学生思维的发展,导致学生思维僵化,“创造”和“变通”的学习能力不强.本文从一道函数题着手谈谈解题视角的多样化,有利于培养学生的良好思维品质,深刻领悟试题
本文两组试验设计分别对生长猪净能和真可消化赖氨酸需要量进行研究,通过回归方程求出最佳需要量。试验一、净能需要量的研究 综合饲养试验和消化代谢试验的结果,通过回归计