达卡气单胞菌（Aeromonas dhakensis）属于致病菌,其毒性较强,携带多种毒力基因,对人体血细胞系和肠细胞都具有毒害作用,目前已从淡水养殖鱼类和临床患者体内分离出。本课题从患病暹罗鳄体内分离出3种气单胞菌,经过斑马鱼毒力实验鉴定得出毒性最强的是达卡气单胞菌。PhoBR（Pho PR）双组分信号转导系统具有调控磷代谢平衡和病原菌毒力等多种功能,已有多项研究发现PhoBR突变后会使细菌毒力减弱,其中结核杆菌的pho P突变株已作为弱毒疫苗进入临床评价阶段,可见Pho PR在病原菌防治中具有重要的研究和利用价值。由于当前尚无有关PhoBR在气单胞菌的功能研究,本课题以分离的高致病性达卡气单胞菌为材料,利用整合型质粒p K18mobsac B构建phoB基因缺失突变株,进而通过表型分析以探究PhoBR在气单胞菌中的生物学作用与利用价值。研究过程如下:首先利用同源重组的原理,在达卡气单胞菌的phoB基因上、下游两侧各选取长约1 kb左右的同源臂片段克隆下来,将两者通过融合PCR方法连接到一起,然后将片段连接到p K18mobsac B质粒上,通过热激法将重组质粒导入Δasd缺陷型大肠杆菌X6097中。然后将大肠杆菌和达卡气单胞菌以一定比例共培养,以接合转移方式将重组质粒转入达卡气单胞菌中,通过卡那霉素和二氨基庚二酸（50μg/m L）筛选含重组质粒的达卡气单胞菌株,最后利用蔗糖敏感基因sac B基因的反向筛选作用,在高浓度的蔗糖平板上筛选出phoB基因缺失菌株。经过革兰氏染色鉴定发现phoB基因的缺失对达卡气单胞菌的外形特征没有造成明显改变;对其的生长曲线测定发现,在低磷培养条件时,野生型菌株和ΔphoB菌株生长都受到严重抑制,而且ΔphoB菌株受到的抑制更严重;在富磷培养基中,两者都可以正常生长,但在两种条件下,ΔphoB菌株比野生型菌株生长缓慢。而在生物被膜产生、碱性磷酸酶的表达、H₂O₂抗性、细菌的运动性以及抗菌肽敏感性方面,ΔphoB菌株比野生型菌株均有所下降。通过半数致死量实验,我们发现ΔphoB菌株的LD₅₀值要远远高于野生型菌株的LD₅₀值,说明phoB基因的缺失可减弱达卡气单胞菌的毒力。目前并未出现关于暹罗鳄达卡气单胞菌病方面的报道,本次研究构建的ΔphoB敲除菌株具有明显的弱毒性,可以有效地减弱达卡气单胞菌的毒性,这为后续探索构建达卡气单胞菌弱毒疫苗菌株提供了科学依据。