论文部分内容阅读
目的建立间歇低氧大鼠模型,通过观察不同组大鼠学习、记忆行为,并检测其海马区TORC1、phospho-CREB和BDNF的表达情况,探讨依达拉奉对间歇低氧大鼠认知障碍的治疗作用及可能机制,为依达拉奉能更好的应用于临床医治阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者的认知功能障碍提供基础的实验研究。方法成年雄性Wistar大鼠120只,经morris水迷宫检测筛选记忆良好,随机数字表法分为正常对照组(NC组)、间歇低氧组(IH组)、依达拉奉干预组(ED组),每组按不同时间点分为3d、7d、14d、21d、28d 5个亚组,每个亚组各8只。IH组及ED组均采用低氧舱模拟间歇低氧环境制造低氧模型,交替向低氧舱内注入不同流速的氮气及压缩的空气,IH组及ED组箱内最低氧浓度达5%,后复至21%,每个循环周期为120s。NC组向低氧箱内持续注入空气,维持氧浓度在21%。造模后采用morris水迷宫检测3组大鼠学习、记忆行为能力,采用免疫组化法检测大鼠海马区TORC1、phospho-CREB和BDNF的蛋白表达;Western blot法用于检测TORC1、phospho-CREB、BDNF蛋白表达。结果1间歇低氧对大鼠认知功能的影响:同一组不同时间点比较:IH组及ED组的大鼠随低氧暴露时间延长从第14d开始逃避潜伏期便逐渐延长,跨越目标象限的时间缩短。IH组14d、21d、28d之间比较差异有统计学意义(P<0.05),ED组28d较14d、21d逃避潜伏期延长,跨越目标象限时间缩短较显著(P<0.05),14d、21d之间比较无明显差异(P>0.05);同一时间点之间不同组的比较:与NC组相比较,IH组、ED组大鼠第14d、21d、28d逃避潜伏期均延长、跨越目标象限时间明显缩短(P<0.05),而ED组则较IH组逃避潜伏期时间缩短、跨越目标象限时间延长(P<0.05);2大鼠海马神经细胞TORC1免疫组化及Western blot结果:同一组不同时间点比较:NC组TORC1蛋白表达及IOD值在各时间点之间比较无明显差异(P>0.05);IH组从低氧第3天开始呈现先增高后降低趋势,即在7d表达高峰后随低氧时间延长逐渐下降,IH组3d、7d、14d、21d、28d之间比较差异有统计学意义(P<0.05);ED组21d、28d较3d、7d、14d表达增多(P<0.05),3d、7d、14d呈现平稳表达趋势,无明显差异(P>0.05);同一时间点不同组比较:与NC组相比较,IH组、ED组TORC1蛋白表达及IOD值在3d、7d、14d、21d、28d均明显升高(P<0.05);与IH组比较,ED组3d、21d、28d升高(P<0.05),7d、14d降低(P<0.05);3大鼠海马神经细胞phospho-CREB免疫组化及Western blot结果:同一组不同时间点比较:NC组phospho-CREB蛋白表达及IOD值在各时间点之间比较无明显差异(P>0.05);IH组从低氧第3天开始呈现先增高后降低趋势,即在14d表达高峰后随低氧时间延长逐渐下降,IH组3d、7d、14d、21d、28d之间比较差异有统计学意义(P<0.05);ED组28d较3d、7d、14d、21d表达增多(P<0.05),3d、7d、14d、21d呈现平稳表达趋势,无明显差异(P>0.05);同一时间点不同组比较:与NC组比较,IH组、ED组phospho-CREB蛋白表达及IOD值在3d、7d、14d、21d、28d均明显升高(P<0.05);与IH组比较,ED组3d、28d升高(P<0.05),7d、14d、21d降低(P<0.05);4大鼠海马神经细胞BDNF蛋白表达及IOD值结果:同一组不同时间点比较:NC组BDNF蛋白表达及IOD值在各时间点之间比较无明显差异(P>0.05);IH组从低氧第3天开始呈现先增高后降低趋势,即在14d表达高峰后随低氧时间延长逐渐下降,IH组3d、7d、14d、21d、28d之间比较差异有统计学意义(P<0.05);ED组28d较3d、7d、14d、21d表达增多(P<0.05),3d、7d、14d、21d呈现平稳表达趋势,无明显差异(P>0.05);同一时间点不同组比较:与NC组比较,IH组、ED组BDNF蛋白表达及IOD值在3d、7d、14d、21d、28d均明显升高(P<0.05);与IH组比较,ED组3d、28d升高(P<0.05),7d、14d、21d降低(P<0.05)。结论间歇低氧可导致大鼠学习记忆功能减退;TORC1、phospho-CREB及BDNF在间歇低氧早期即被诱导表达,呈一过性增高随之降低,持续时间较短,TORC1可能仅在间歇低氧7d左右参与了促进phospho-CREB/BDNF通路的活化。而给予依达拉奉干预后,上调并延长了TORC1、phospho-CREB及BDNF的持续表达时间,大鼠学习记忆能力较低氧组提高,对间歇低氧后脑组织有保护作用。本研究提示我们TORC1/CREB/BDNF通路参与了依达拉奉的脑保护作用,为依达拉奉更好的应用于临床提供了理论依据。